[发明专利]FGFR3基因突变检测在膀胱癌诊断中的应用及试剂盒

说明书

本发明公开了一种FGFR3基因突变检测在膀胱癌诊断中的应用及试剂盒。本发明通过对尿脱落肿瘤细胞的细胞核DNA进行FGFR3基因突变位点的检测，制备膀胱癌诊断试剂盒中。所述检测的FGFR3基因突变位点为R248C、S249C、Y375C其中至少一种。检测R248C突变位点的引物如SEQ ID NO：1～2所示、探针如SEQ ID NO：3所示；检测S249C突变位点的引物如SEQ ID NO：4～5所示、探针如SEQ ID NO：6所示；检测Y375C突变位点的引物如SEQ ID NO：7～8所示、探针如SEQ ID NO：9所示。本发明通过尿脱落肿瘤细胞细胞核DNA进行FGFR3的突变检测，为膀胱癌的辅助诊断提供一种无创的且灵敏度更高的检测方法。

技术领域

本发明属于生物医学诊断技术领域，FGFR3基因突变检测在膀胱癌中诊断的应用及试剂盒。

背景技术

膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。膀胱恶性肿瘤细胞之间是存在异质性的，并表现出不同的生物学特性，这些特性通常是由遗传不稳定性引起的。FGFR3可导致酪氨酸激酶受体基因激活，触发几种下游激酶途径，导致细胞转化。超过65％的非肌肉浸润性膀胱癌和15％的肌肉浸润性膀胱癌携带FGFR3突变，总突变率为40-50％。FGFR3是尿路上皮癌的最常见的突变基因，为膀胱癌的诊断提供了目标靶点。

膀胱镜，影像学检查(超声，CT泌尿道成像，MRI检查，静脉尿路造影检查，全身骨显像，PET-CT检查)，脱落细胞学，尿液膀胱肿瘤标志物或者FISH检查是膀胱癌最常用的检测方法。然而，膀胱镜是有创检测，医从性不佳，同时容易引起出血、感染等并发症。影像学多数早期灵敏度不佳，不能作为早期肿瘤的检测。脱落细胞学需要专业的病理医生人工判断，且在低级别肿瘤中漏诊率高。尿液膀胱肿瘤标志物(NMP22)和FISH，分别存在灵敏度偏低，稳定性差和成本高等问题。

发明内容

本发明的目的是，提供一种FGFR3基因突变检测在膀胱癌中诊断的应用及试剂盒。旨在解决现有技术中膀胱癌的诊断方法灵敏度偏低，稳定性差和成本高等问题。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

本发明提供FGFR3基因突变检测在制备膀胱癌诊断试剂盒中的应用，通过对尿脱落肿瘤细胞的细胞核DNA进行FGFR3基因突变位点的检测制备膀胱癌诊断试剂盒。

作为优选实施方案，所述FGFR3基因突变位点为R248C、S249C、Y375C其中至少一种。

作为优选实施方案，检测R248C突变位点的引物如SEQ ID NO：1～2所示、探针如SEQ ID NO：3所示；检测S249C突变位点的引物如SEQ ID NO：4～5所示、探针如SEQ ID NO：6所示；检测Y375C突变位点的引物如SEQ ID NO：7～8所示、探针如SEQ ID NO：9所示。

作为优选实施方案，所述用于FGFR3点突变检测的探针5′端带有荧光基团，所述荧光基团可以是VIC、FAM、ROX或HEX任意一种或几种；优选的，所述用于FGFR3点突变检测的探针3′端带有淬灭基团，所述淬灭基团可以是MGB，也可以是BHQ1。

本发明还提供一种用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，所述试剂盒包括细胞核DNA提取试剂和FGFR3基因突变检测试剂。

作为优选实施方案，所述试剂盒还包括细胞膜裂解试剂和细胞核分选装置。

作为优选实施方案，所述细胞核DNA提取试剂包括试剂Ⅰ、试剂Ⅱ、试剂Ⅲ、洗涤液I、洗涤液II、洗脱液；

所述试剂Ⅰ的组成为：1～3mol/L的异硫氰酸胍、5～10mmol/L的柠檬酸钠、0.01～0.05g/ml的聚多卡醇、3～5mmol/L的β-巯基乙醇，溶剂为乙醇和水，其中乙醇的体积百分比为15～45％；