[发明专利]一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法

权利要求书

1.一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，包括以下步骤：

原料预处理：取红松松塔整体烘干、粉碎；

萃取：对红松松塔粉末萃取，获松塔提取液；

浓缩干燥：将萃取液浓缩，并冻干；

复溶：（3）中冻干物复溶于乙酸乙酯，抽滤；

正相硅胶柱层析：正相硅胶对（4）的复溶物进行纯化，并用MTT筛选抗癌活性高成分；

正相硅胶介质中压柱层析：采用正相硅胶介质中压柱层析对（5）中活性最高组分进行纯化，并用MTT筛选抗癌活性高成分；

反相硅胶介质中压柱层析：采用反相硅胶介质中压柱层析对（6）中活性最高组分进行纯化，并用MTT筛选抗癌活性高成分；

结晶：将（7）中获得的活性最高成分置于低温下结晶，得化合物单体。

2.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（1）所述将红松松塔整体放入烘干箱内50～60℃进行干燥，使含水量降至6%，将干燥后的红松松塔进行粉碎，过30～50目筛，得红松松塔粉末。

3.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（2）所述的萃取：将红松松塔粉末放入罐中，加入50～90%无水乙醇、甲醇做溶剂，料液比1/10～1/30；超声萃取2～3小时，超声功率300～500W，萃取温度70～85℃，获红松松塔萃取液。

4.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（3）所述的浓缩干燥：将萃取液进行减压浓缩，真空度0.075 MPa，温度70～85℃，浓缩至萃取液体积的1/30～1/20，回收乙醇；浓缩液真空冻干，冷阱温度-80～-60℃，真空度10～1 Pa，得冻干物。

5.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（4）所述的复溶：冻干物加入5～20倍乙酸乙酯超声溶解，超声时间20～40分钟，超声功率200～300W，抽滤，浓缩，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物。

6.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（5）所述的正相硅胶柱层析：乙酸乙酯萃取物用质量比10～40倍的200～300目硅胶进行柱层析，以体积比7/1～15/1的氯仿/甲醇或二氯甲烷/甲醇进行等度层析，以1/5～1/2柱体积为单位收集洗脱液，浓缩，冷冻干燥各组分，各冻干组分溶于DMSO中，加入无菌0.01 M PBS缓冲液，使DMSO最终浓度V：V为0.1～1％，制备供试液，并用MTT法筛选出对HepG2细胞活性抑制最强的组分。

7.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（6）所述的正相硅胶介质中压柱层析： 40 μm正相硅胶柱20 g，上样量0.1 g～1 g，流动相氯仿/甲醇V：V，8/1～12/1或二氯甲烷/甲醇V：V，8/1～12/1，流速10 mL/min～25 mL/min，检测波长220 nm～250 nm。

8.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（7）所述的反相硅胶介质中压柱层析：40 μm反相硅胶柱20 g，上样量0.1 g～1 g，流动相乙腈/水V：V，1/1～9/1或甲醇/水V：V，1/1～9/1，流速10 mL/min～25 mL/min，检测波长220 nm～250 nm。

9.根据权利1所述一种红松松塔抗肝细胞癌化合物筛选方法，其特征在于，步骤（8）所述的结晶： 甲醇与水的体积比为8/1～60/1，温度为60～80℃形成饱和溶液，置于4～8℃结晶24～96小时。