[发明专利]一种鉴别黑龙江流域江鳕和额尔齐斯河流域江鳕的分子标记和引物以及方法与应用在审
| 申请号： | 202111237616.7 | 申请日： | 2021-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN113930519A | 公开（公告）日： | 2022-01-14 |
| 发明（设计）人： | 栾培贤;户国;董晓丽;张晓峰 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 王志新 |
| 地址： | 150010 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 黑龙江 流域 额尔齐斯 河流 域江鳕 分子 标记 引物 以及 方法 应用 | ||
1.一种鉴别黑龙江流域江鳕和额尔齐斯河流域江鳕的SNP分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
2.一种鉴别黑龙江流域江鳕和额尔齐斯河流域江鳕的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。
3.一种鉴定黑龙江流域江鳕和额尔齐斯河流域江鳕的试剂盒，其特征在于，含有权利要求2所述的引物。
4.一种鉴别黑龙江流域江鳕和额尔齐斯河流域江鳕的方法，其特征在于，所述方法如下：
(1)提取待测样本的基因组DNA；
(2)以步骤(1)所述的基因组DNA为模板，以SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4为引物进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；
(3)利用限制性内切酶NlaIII对PCR扩增产物进行酶切，获得酶切产物，对酶切产物进行电泳检测，如果电泳条带大小111bp单条带的个体为黑龙江流域江鳕，如果电泳条带大小为30bp和81bp两条带或81bp一条带的个体为额尔齐斯河流域江鳕。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR反应的条件为95℃变性2min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，再72℃延伸3min，4℃保温。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR反应的体系为：DreamTaq25μL 2×PCR Master Mix、19μL无DNA酶水、2μL 10μM引物SEQ ID NO:3、2μL 10μM引物SEQ ID NO:4和2μL 50ng/μL DNA模板。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述酶切反应条件为：37℃水浴酶切30min，80℃水浴终止反应5min。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述酶切反应体系为：17μL无DNA酶水、2μL 10×FastDigest Green buffur、10μL PCR扩增产物和1μLNlaIII限制性内切酶。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述电泳采用的是3％的琼脂糖凝胶或8％聚丙烯酰胺凝胶。
10.权利要求1所述的分子标记、权利要求2所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在黑龙江流域江鳕和额尔齐斯河流域江鳕种质资源鉴定中的应用。
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