[发明专利]一种检测血清中伏立康唑浓度的HPLC法

说明书

本发明公开了一种利用高效液相色谱法(HPLC)法测定血清中伏立康唑浓度的方法，涉及医疗技术及体内药物分析领域，包括对照品溶液的制备、内标溶液尼莫地平的配制、色谱条件及标准曲线的确定、伏立康唑最低检测限、定量限、血清中的回收率、稳定性确定、血样的处理方法和测定等步骤。本发明公开的HPLC法操作简便，结果准确，耐用性好，该方法适用于各种合并用药状态下血清中伏立康唑的检测，经临床使用，能帮助患者根据该法监测的血药浓度及时进行剂量调整，避免疗效不佳或不良反应的发生，使用药更加安全有效。该检测血清中伏立康唑浓度的HPLC方法符合生物样品的测定要求，适用于临床治疗药物浓度监测、动物及人体药动学研究。

技术领域

本发明涉及医疗技术及体内药物分析领域，特别涉及一种检测血清中伏立康唑血药浓度的HPLC法。

背景技术

伏立康唑属于第二代三唑类广谱抗真菌药，是临床常用于治疗侵袭性肺曲霉病、念珠菌血症等侵袭性真菌病的一线用药。由于伏立康唑的代谢具有可饱和性，其药代动力学呈非线性特征，伏立康唑的血药浓度与临床疗效和安全性存在极大相关性。患者年龄、体重、肝功能、CYP2C19基因多态性、炎症因子、白蛋白、合并用药等均能影响药物体内过程，使得血药浓度在不同患者体内，甚至同一患者体内高度变异，因此血药浓度的测定对伏立康唑的用药起到关键的指导作用。目前国内外多报道采用HPLC-MS或HPLC的方法，虽然精密度和准确度高，但HPLC-MS仪器昂贵，普及较难，报道的方法中流动相采用缓冲盐体系，进行梯度洗脱，配制和使用均不便，且血样处理复杂。因此，为了使临床能够得到快速有效的伏立康唑用药指导，建立一种伏立康唑快速、简便、准确、能普及的血药浓度测定HPLC方法具有很重要的意义。

发明内容

本发明旨在克服现有技术和方法的不足，提供一种快速、简便、准确、能普及的伏立康唑血药浓度测定HPLC方法，为临床合理用药提供依据。

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述利用HPLC法测定伏立康唑血药浓度方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取伏立康唑对照品，精密称定，加甲醇溶解并制成2mg·mL^-1的储备液，置4℃冷藏备用。精密量取储备液，分别加水稀释制成200、20和2μg·mL^-1的对照品溶液。

(2)内标溶液的制备：取尼莫地平对照品，精密称定，加甲醇溶解并制成1mg·mL^-1的内标储备液。精密量取储备液适量，加甲醇制成200μg·mL^-1的内标溶液。

(3)色谱条件：色谱柱：MerckSTARLP RP-18 endcapped(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈-水(53∶47，V/V)；流速1.0mL·min^-1；检测波长：256nm；柱温：35℃；进样量：50μL。

(4)血样处理：精密量取血清样品200μL，加入6μL内标溶液，涡旋震荡30秒，加入乙腈400μL，涡旋振荡2min，静置10min，11000r·min-1离心10min，取上清液50μL，按步骤(3)项下色谱条件，进样测定。

(5)标准曲线、最低检测限和定量限确定：取空白血清200μL 7份，分别对应加入20μg·mL^-1或200μg·mL^-1的对照品溶液及内标溶液6μL，制成0.3、0.6、1.5、3、6、12、20μg·mL^-1的系列标准溶液。按步骤(4)处理后，按步骤(3)进样测定峰面积。以伏立康唑的各浓度(C)为横坐标，校正因子f(伏立康唑的峰面积/内标峰面积)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程f＝0.1251C+0.0076(R²＝0.9999，n＝7)。按信噪比(S/N)≈10时，伏立康唑最低定量限为0.8ng，当S/N≈3时，最低定量限为0.3ng。