[发明专利]siRNA输送载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种siRNA输送载体，其特征在于，该siRNA输送载体包括载药纳米核心和包裹在所述载药纳米核心外周的外泌体，所述载药纳米核心为载有siRNA的光激活聚合物所形成的纳米核心，所述siRNA为PAK4 siRNA，所述外泌体、所述光激活聚合物与所述siRNA的质量比为2.5-100：5-25：1；

所述PAK4 siRNA为完全反向互补的正义链和反义链，所述正义链和所述反义链的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的任意一对所示；

所述载药纳米核心为光激活聚合物与siRNA通过静电相互作用形成的复合物，所述外泌体分离自巨噬细胞；

所述光激活聚合物的制备过程包括：将聚乙烯亚胺与酮缩硫醇进行交联聚合形成交联物，将所述交联物与光敏剂混合进行酰胺反应后，进行透析、干燥；其中，所述聚乙烯亚胺、光敏剂与酮缩硫醇的摩尔量比值为4-6：2.5-5：1；所述光敏剂为含羧基的二氢卟吩类光敏剂；所述交联聚合的条件包括：温度为10-40℃，搅拌速率为100-200rpm，时间为24-48h；所述酰胺反应的条件包括：温度为10-40℃，搅拌速率为100-200rpm，时间为24-48h。

2.根据权利要求1所述的siRNA输送载体，其特征在于，所述外泌体、所述光激活聚合物与所述siRNA的质量比为10-50：8-20：1；

所述siRNA输送载体的平均粒径为100-200nm。

3.根据权利要求1所述的siRNA输送载体，其特征在于，所述光敏剂选自二氢卟吩e6、二氢卟吩e4及两者组合形成的复合型光敏剂中的至少一种。

4.一种权利要求1所述的siRNA输送载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将聚乙烯亚胺与酮缩硫醇进行交联聚合形成交联物，将所述交联物与光敏剂混合进行酰胺反应后，进行透析、干燥得到光激活聚合物，将siRNA与所述光激活聚合物进行孵育，形成载药纳米核心；

（2）将步骤（1）得到的所述载药纳米核心与外泌体混合后挤出，使得所述外泌体包裹在所述载药纳米核心的外周；

所述siRNA为PAK4 siRNA，所述PAK4 siRNA为完全反向互补的正义链和反义链，所述正义链和所述反义链的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9和SEQID NO.10中的任意一对所示；

其中，所述载药纳米核心为光激活聚合物与siRNA通过静电相互作用形成的复合物；所述外泌体分离自巨噬细胞；所述外泌体、所述光激活聚合物与所述siRNA的质量比为2.5-100：5-25：1；所述聚乙烯亚胺、光敏剂与酮缩硫醇的摩尔量比值为4-6：2.5-5：1；所述光敏剂为含羧基的二氢卟吩类光敏剂；所述交联聚合的条件包括：温度为10-40℃，搅拌速率为100-200rpm，时间为24-48h；所述酰胺反应的条件包括：温度为10-40℃，搅拌速率为100-200rpm，时间为24-48h。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述光激活聚合物与所述siRNA的质量比为10-50：8-20：1；

所述siRNA输送载体的平均粒径为100-200nm。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述光敏剂选自二氢卟吩e6、二氢卟吩e4及两者组合形成的复合型光敏剂中的至少一种。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述孵育的条件包括：温度为10-40℃，时间为10-20min；

步骤（2）中所述混合的条件包括：温度为10-40℃，吹打次数为10-20次。

8.根据权利要求1至3中任意一项所述的siRNA输送载体和根据权利要求4至7中任意一项所述的制备方法制得的siRNA输送载体在制备抗黑色素瘤药物和/或制备抗结肠癌药物中的应用。