[发明专利]siRNA输送载体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，公开了一种siRNA输送载体及其制备方法和应用。siRNA输送载体包括载药纳米核心和包裹在所述载药纳米核心外周的外泌体，所述载药纳米核心为载有siRNA的光激活聚合物所形成的纳米核心。siRNA输送载体的制备方法包括以下步骤：将siRNA与光激活聚合物进行孵育，形成载药纳米核心；将所述载药纳米核心与外泌体混合后挤出，使得所述外泌体包裹在所述载药纳米核心的外周。本发明还公开了siRNA输送载体在制备用于肿瘤免疫治疗药物中的应用。该siRNA输送载体能够提高肿瘤免疫原性、促进瘤内免疫浸润、增敏肿瘤免疫治疗。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地，涉及一种siRNA输送载体及其制备方法和应用。

背景技术

免疫疗法是当前肿瘤治疗领域最具前景的方向之一，然而，临床上该疗法的响应率较低，仅为10-30％。究其根源，除了肿瘤本身免疫原性弱，难以激发免疫系统产生有效的抗肿瘤免疫反应之外，肿瘤组织中免疫(杀伤性T)细胞浸润不足，导致免疫抑制的肿瘤微环境也是免疫疗法响应率低的重要原因。因此，促进瘤内T细胞浸润及增强肿瘤免疫原性，是提高肿瘤免疫治疗应答率的重要突破口。

已有研究发现，P21活化激酶4(p21-activated kinase 4，PAK4)是肿瘤阻止杀伤性T细胞浸润，实现免疫逃逸的关键靶点，PAK4可促进β-catenin蛋白磷酸化及核转移，激活WNT/β-catenin通路，从而导致瘤内T细胞浸润不足。因此，抑制PAK4是促进瘤内T细胞浸润，解除肿瘤免疫抑制状态的关键。

siRNA药物是最具战略前景的生物制药技术之一，近年来其获批上市的速度呈加速趋势，目前已有四款siRNA药获得FDA批准，分别是Alnylam公司的Onpattro、Givlaari、Oxlumo及Leqvio，且预计在未来几年里将会有更多siRNA药物进入市场。siRNA药物可从mRNA水平阻止致病蛋白的表达，具有效率高、特异性好及长效等优势。

目前针对抑制PAK4表达的siRNA的设计开发，以及如何将该siRNA安全高效地输送到肿瘤部位作用靶点是促进瘤内T细胞浸润、提高肿瘤免疫治疗应答率的研究重点。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种siRNA输送载体及其制备方法和应用，该载体能够提高肿瘤免疫原性、促进瘤内免疫浸润、增敏肿瘤免疫治疗。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种siRNA输送载体，该siRNA输送载体包括载药纳米核心和包裹在所述载药纳米核心外周的外泌体，所述载药纳米核心为载有siRNA的光激活聚合物所形成的纳米核心。

优选地，所述外泌体、所述光激活聚合物与所述siRNA的质量比为2.5-100：5-25：1，优选为10-50：8-20：1；

优选地，所述siRNA输送载体的平均粒径为100-200nm。

优选地，所述载药纳米核心为光激活聚合物与siRNA通过静电相互作用形成的复合物；

优选地，所述光激活聚合物的制备过程包括：将聚乙烯亚胺与酮缩硫醇进行交联聚合形成交联物，将所述交联物与光敏剂混合进行酰胺反应后，进行透析、干燥；

优选地，所述聚乙烯亚胺、光敏剂与酮缩硫醇的摩尔量比值为4-6：2.5-5：1；

优选地，所述光敏剂为含羧基的二氢卟吩类光敏剂，更优选地，所述光敏剂选自二氢卟吩e6、二氢卟吩e4及两者组合形成的复合型光敏剂中的至少一种；

优选地，所述交联聚合的条件包括：温度为10-40℃，搅拌速率为100-200rpm，时间为24-48h；所述酰胺反应的条件包括：温度为10-40℃，搅拌速率为100-200rpm，时间为24-48h。

优选地，所述siRNA为PAK4 siRNA；