[发明专利]特异性抑制PAK4基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，公开了一种特异性抑制PAK4基因表达的siRNA及其应用。特异性抑制PAK4基因表达的siRNA含有完全反向互补的正义链和反义链，所述正义链和所述反义链的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的任意一对所示。本发明还提供了含有上述siRNA的药物组合物。本发明提供的siRNA药物组合物可有效沉默小鼠PAK4基因表达，阻断Wnt/β‑catenin信号通路，促进肿瘤免疫浸润。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地，涉及一种特异性抑制PAK4基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

免疫疗法是当前肿瘤治疗领域最具前景的方向之一，然而临床上该疗法的响应率较低，仅为10-30％；肿瘤组织中免疫(杀伤性T)细胞浸润不足是免疫疗法临床失败的重要原因。已有研究发现，P21活化激酶4(p21-activated kinase 4，PAK4)是肿瘤阻止杀伤性T细胞浸润、实现免疫逃逸的关键靶点。PAK4可促进β-catenin蛋白磷酸化及核转移，激活WNT/β-catenin通路，从而导致瘤内T细胞浸润不足。因此，抑制PAK4是促进杀伤性T细胞浸润肿瘤组织，解除肿瘤免疫抑制状态的关键。

siRNA药物是最具战略前景的生物制药技术之一，近年来其获批上市的速度呈加速趋势，目前已有四款siRNA药获得FDA批准，分别是Alnylam公司的Onpattro、Givlaari、Oxlumo及Leqvio，且预计在未来几年里将会有更多siRNA药物进入市场。siRNA药物可从mRNA水平阻止致病蛋白的表达，具有效率高、特异性好及长效等优势。

但是，目前尚无利用RNA干扰技术(RNAinterfering，RNAi)抑制PAK4表达、促进肿瘤免疫浸润的研究。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种特异性抑制PAK4基因表达的siRNA及其应用，该siRNA可有效沉默小鼠PAK4基因的表达，阻断Wnt/β-catenin信号通路，促进肿瘤免疫浸润。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种特异性抑制PAK4基因表达的siRNA，所述siRNA含有完全反向互补的正义链和反义链，所述正义链和所述反义链的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的任意一对所示。

优选地，所述正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选地，所述正义链和/或所述反义链的至少一个核苷酸的核糖基上引入核糖修饰，所述正义链和/或所述反义链的磷酸-糖骨架中的磷酸酯基的至少一个为具有修饰基团的磷酸酯基。

优选地，所述核糖修饰为甲氧基修饰或氟代修饰，所述具有修饰基团的磷酸酯基为磷酸二酯键中的氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。

优选地，按照5'末端到3'末端的方向，所述正义链的第5、7、8、9位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸，所述正义链中其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸，所述反义链的第2、6、8、9、14、16位的核苷酸为氟代修饰的核苷酸，所述反义链中其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸；其中，所述氟代修饰的核苷酸为核糖基的2'-羟基被氟取代而形成的核苷酸，所述甲氧基修饰的核苷酸为核糖基的2'-羟基被甲氧基取代而形成的核苷酸。

优选地，所述具有修饰基团的磷酸酯基存在于由以下位置所组成的组中的至少一处：