[发明专利]一种动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法

权利要求书

1.一种动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，其特征在于，所述的兴奋剂为去氢表雄酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮，包括如下步骤：

步骤1，在待测体液中加入去氢表雄酮-D₅内标中间液，之后用二氯甲烷提取，从得到的提取液中分离出二氯甲烷层，将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，并与二氯甲烷层合并得到上清液，然后将移取的上清液吹近干，用乙腈的水溶液溶解，最后涡旋振荡、超声过滤，得到待测液；

步骤2，将待测液用高效液相色谱串联含有电喷雾离子源的质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；

由所述的7种蛋白同化制剂类兴奋剂标准物质中间液用空白基质溶液配制的混合标准工作液，用与待测液相同的条件进行测定，得到相应的谱图信息；

步骤3，将步骤2形成的两组谱图信息进行比对，待测液中兴奋剂的保留时间与混合标准工作液中对应兴奋剂的保留时间偏差在±5％以内，且不超过±0.5min，待测液中兴奋剂的定性离子对的相对离子丰度与混合标准工作液中对应兴奋剂的相对离子丰度一致，且每个离子的信噪比≥3，得到所述待测液和混合标准工作液中所有兴奋剂的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中对应的内标物的峰面积；

步骤4，结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、内标物的峰面积与浓度，以及待测液中内标物的浓度与峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测体液体积、二氯甲烷的总体积、移取的上清液体积、乙腈的水溶液体积、稀释倍数，采用内标法，求出去氢表雄酮的含量；

结合混合标准工作液中待测组分的含量和峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测体液体积、二氯甲烷的总体积、移取的上清液体积、乙腈的水溶液体积、稀释倍数，采用基质外标法，求出除去氢表雄酮以外所有兴奋剂的含量。

2.根据权利要求1所述的动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1在分离二氯甲烷层时，待测体液、所述的同位素内标中间液和二氯甲烷的体积比为(4.8～5.2)：0.1：20。

3.根据权利要求1所述的动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1在待测体液中加入所述的同位素内标中间液涡旋混匀后，再加入二氯甲烷涡旋振荡，最后将所得的混合体系依次超声、离心，得到二氯甲烷层。

4.根据权利要求3所述的动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，其特征在于，所述的混合体系先超声8～15min，再7000～9000r/min离心4～8min，得到二氯甲烷层。

5.根据权利要求1所述的动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤2中的高效液相色谱采用C18色谱柱，流动相A为甲酸的水溶液，甲酸的体积占整个溶液体积的0.1％，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序如下：

0～2min内，流动相A的体积比例保持75％；2～5min内，流动相A的体积比例由75％线性减小至30％；5～7min内，流动相A的体积比例保持30％；7～7.1min内，流动相A的体积比例由30％线性减小至10％；7.1～9min内，流动相A的比例保持10％，9～9.1min内，流动相A的比例由10％线性增加至75％，9.1～13min内，流动相A的比例保持75％。

6.根据权利要求1所述的动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤2所述的质谱仪采用如下参数进行工作：

扫描方式为多反应监测，毛细管电压为3.5kv，鞘气温度为400℃，干燥器温度为300℃，鞘气流量为11L/min，干燥器流量为7L/min。

7.根据权利要求1所述的动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1将移取的上清液在35～50℃下用氮气吹近干。

8.根据权利要求1所述的检测动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的方法，其特征在于，步骤2和步骤3中所述的谱图信息为色谱峰、定性离子对和每个离子的信噪比。