[发明专利]一种动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法

说明书

本发明一种动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，在体液中加入同位素内标中间液，用二氯甲烷提取，分离出二氯甲烷层，剩余部分提取合并得到上清液，移取上清液吹近干，溶解、涡旋振荡、超声过滤；将待测液和混合标准工作液用高效液相色谱串联质谱仪测定，得到谱图信息；结合混合标准工作液中待测组分含量与峰面积、内标物峰面积与浓度，及待测液中内标物浓度与峰面积、待测组分峰面积、体液体积、二氯甲烷的体积、移取的上清液体积、稀释倍数，求出去氢表雄酮含量；结合混合标准工作液中待测组分含量和峰面积、待测液中待测组分峰面积、体液体积、二氯甲烷的体积、移取的上清液体积、稀释倍数，求出其余兴奋剂的含量。

技术领域

本发明涉及兴奋剂检测技术领域，具体为一种动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法。

背景技术

动物在食用含兴奋剂的饲料后，会造成肌肉及组织中不同程度的残留，继而通过生物链在人体内残留，将导致食用者出现不同程度的中毒现象，而运动员也属于其中的食用者。为维护竞技体育的公平和纯洁，保证运动员的身体健康，兴奋剂检测已成为所有体育比赛中不可或缺的重要环节。

动物体液中常见的7种蛋白同化制剂类兴奋剂，即去氢表雄酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮，需要对它们进行检测。

为检测上述兴奋剂，技术人员先后尝试过高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用(GC/MSD)等方法，但检测过程中需要对这些兴奋剂进行衍生化，同时也会产生操作复杂、检测周期长、灵敏度较差等问题，导致目前不能对动物体液中的7种蛋白同化制剂类兴奋剂进行同时检测。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，可同时检测出动物体液中是否含有7种蛋白同化制剂类兴奋剂。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种动物体液中7种蛋白同化制剂类兴奋剂的检测方法，所述的兴奋剂为去氢表雄酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮，包括如下步骤：

步骤1，在待测体液中加入去氢表雄酮-D₅同位素内标中间液，之后用二氯甲烷提取，从得到的提取液中分离出二氯甲烷层，将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，并与二氯甲烷层合并得到上清液，然后将移取的上清液吹近干，用乙腈的水溶液溶解，最后涡旋振荡、超声过滤，得到待测液；

步骤2，将待测液用高效液相色谱串联含有电喷雾离子源的质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；

由所述的7种蛋白同化制剂类兴奋剂标准物质中间液用空白基质溶液配制的混合标准工作液，用与待测液相同的条件进行测定，得到相应的谱图信息；

步骤3，将步骤2形成的两组谱图信息进行比对，待测液中兴奋剂的保留时间与混合标准工作液中对应兴奋剂的保留时间偏差在±5％以内，且不超过0.5min，待测液中兴奋剂的定性离子对的相对离子丰度与混合标准工作液中对应兴奋剂的相对离子丰度一致，且每个离子的信噪比≥3，得到所述待测液和混合标准工作液中所有兴奋剂的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中对应的内标物的峰面积；

步骤4，结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、内标物的峰面积与浓度，以及待测液中内标物的浓度与峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测体液体积、二氯甲烷的总体积、移取的上清液体积、乙腈的水溶液体积、稀释倍数，采用内标法，求出去氢表雄酮的含量；

结合混合标准工作液中待测组分的含量和峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测体液体积、二氯甲烷的总体积、移取的上清液体积、乙腈的水溶液体积、稀释倍数，采用基质外标法，求出除去氢表雄酮以外所有兴奋剂的含量。