[发明专利]一种非诊断目的双抗夹心酶联免疫检测蜡样芽胞杆菌的方法

说明书

本发明公开了一种非诊断目的双抗夹心酶联免疫检测蜡样芽胞杆菌的方法，本发明利用合成Cu/CeOsubgt;2/subgt;纳米颗粒作为模拟酶，替代HRP与二抗标记(偶联)，其具有辣根过氧化物酶(HRP)活性。进一步以抗B.cereus的单克隆抗体作为捕获抗体(包被抗体)，抗B.cereus的多克隆抗体作为检测抗体，Cu/CeOsubgt;2/subgt;纳米颗粒作为模拟酶标记二抗，建立了B.cereus的夹心ELISA分析方法，该方法具有灵敏度高、特异型好、成本低、操作简单，其用于食品中蜡样芽胞杆菌B.cereus的快速、高通量、低成本检测。

技术领域

本发明涉及蜡样芽胞杆菌的检测技术领域，具体地，涉及一种非诊断目的双抗夹心酶 联免疫检测蜡样芽胞杆菌的方法。

背景技术

蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus，B.cereus)广泛存在于自然界，它是一种条件致病菌， 可引起腹泻和呕吐两种不同症状的食物中毒。B.cereus能很好地适应不同环境，如土壤、 植物、昆虫和哺乳动物的肠道。由于这些习性，它经常从食物分离。据报道牛奶、熟食、 蔬菜等3种食品的污染率均高于30％。蜡样芽胞杆菌引起的食物中毒事件严重威胁食品安全，甚至严重威胁人类生命安全。

目前，检测B.cereus的方法有培养法、PCR法、免疫分析法。培养法是B.cereus鉴定的“金标准”方法包括培养分离、选择性富集、生化鉴定、血清学鉴定，但检测时间一般 需要2～3天。PCR法针对B.cereus属的特异性片段DNA，具有灵敏度高、检测时间短 的特点。但它往往不能消除增菌、细胞破碎和核酸提取的复杂程序。且对于B.cereus群物 种来说，由于高度保守且16S rRNA基因序列相似，可能导致假阳性。

尽管食源性致病菌的检测方法在不断发展，酶联免疫吸附法(ELISA)凭借其简便、特 异、灵敏高通量、不需要大型仪器，成为目前检测微生物的常用方法。但值得注意的是，传统ELISA将目标浓度转化为颜色变化的能力依赖于天然酶，如HRP或ALP。然而，高 成本和严格的存储条件阻碍了它们的应用。纳米酶由于成本低、制备方便、稳定性好等特 点具有潜在的替代天然酶的可能性。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种非诊断目的双抗夹心酶联免 疫检测蜡样芽胞杆菌的方法，本发明将纳米酶与抗体结合并建立夹心ELISA法首次用于 蜡样芽胞杆菌B.cereus的检测，为食品中蜡样芽胞杆菌B.cereus的快速低成本检测提供新方法。

本发明的第一个目的是提供一种Cu/CeO₂纳米颗粒。

本发明的第二个目的是提供一种Cu/CeO₂纳米颗粒的制备方法。

本发明的第三个目的是提供所述制备方法制备得到的Cu/CeO₂纳米颗粒。

本发明的第四个目的是所述的Cu/CeO₂纳米颗粒在制备酶联免疫试剂盒或进行酶联免 疫反应中的应用。

本发明的第五个目的是提供一种酶标二抗。

本发明的第六个目的是提供任一所述的Cu/CeO₂纳米颗粒，或所述的模拟酶标二抗在 构建酶联免疫法检测方法和/或酶联免疫试剂盒中的应用。

本发明的第七个目的是提供一种非诊断目的双抗夹心酶联免疫检测蜡样芽胞杆菌的 方法。

本发明的第八个目的是提供一种双抗夹心酶联免疫检测蜡样芽胞杆菌的试剂盒。