[发明专利]CD47结合分子及其应用

说明书

本发明提供了一种CD47结合分子及其应用。所述的CD47结合分子包括CD47抗体或来源于该抗体的能够免疫特异性结合CD47的生物活性片段，可为动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体，所述CD47抗体的CDR包括抗人CD47抗体1C8的CDR中的至少一个CDR，其余所有CDR选自：抗人CD47抗体1C8的三个重链以及三个轻链CDR。本发明的CD47结合分子表现出只作用于肿瘤细胞而不影响正常细胞功能的高效低毒副作用。

技术领域

本发明涉及能够免疫特异性地结合到CD47的分子，具体涉及CD47抗体及来源于该抗体的能够免疫特异性结合CD47的生物活性片段，以及它们在治疗和诊断肿瘤和其他CD47相关疾病中的应用。

背景技术

CD47是一种广泛表达在细胞表面的约50KD的跨膜糖蛋白，其结构主要包括胞外N端的一个IgV-like结构域，五个高度疏水的跨膜结构域和一个具有多种剪接形式的胞内肽段。CD47因其功能多与整合素相关，因此又被称为整合素相关蛋白(Integrin AssociatedProtein,IAP)。CD47在细胞自我识别过程中发挥着重要作用。

信号调节蛋白家族SIRPα是CD47重要的配体，它主要表达在神经元、树突细胞和巨噬细胞表面。SIRPα是一个单次跨膜的整合膜蛋白，胞外区含有三个IgV-like结构域，胞内肽段含有2个ITIM(immunoreceptor tyrosine inhibitory motif)模序。其中，N端IgV-like结构域介导SIRPα与CD47的IgV-like结构域相互作用，而胞内ITIM可招募并激活SHP-1/2(Src-homology 2(SH2)-domain-containing tyrosinephosphatases)。

CD47-SIRPα是机体内重要的“自我”识别信号。正常情况下当CD47结合SIRPα时发出“别吃我”信号，SIRPα胞内ITIM招募并激活SHP-1，通过SHP-1抑制下游酪氨酸激酶依赖的信号途径，调控巨噬细胞，抑制吞噬作用。但这一保护机制易被肿瘤细胞利用。人们最先在卵巢癌中发现CD47，随后相继在慢性骨髓白血病、急性髓性白血病、膀胱癌等肿瘤细胞中都发现CD47表达。并且肿瘤细胞中CD47的表达量要远比正常细胞高，过表达CD47帮助肿瘤细胞免受巨噬细胞的吞噬从而逃过固有免疫系统的监视。

肿瘤细胞通过高表达CD47骗过免疫系统，那么在理论上可以通过阻断CD47-SIRPα信号来促进免疫系统对肿瘤细胞的清除作用。事实上，通过抗CD47或SIRPα抗体来阻断CD47-SIRPα信号已经被证明确实可以促进肿瘤细胞的清除。因此，CD47作为一个潜在的肿瘤免疫治疗靶点受到了广泛的关注。目前，全球已经有多家公司在投入开发CD47抗体。其中进展较快的是Forty seven公司开发的Hu5F9。但是，由于CD47在体内广泛表达，抗体会影响机体内正常CD47的功能，因此CD47抗体在临床上出现的副作用成为了抗体开发的巨大挑战。本领域原有技术运用过程中产生的抗体，起初易出现血凝，随后出现与红细胞结合的副作用，这样就会在临床上浪费了大量的抗体，并且降低了药物的安全性，影响了疗效，像Hu5F9在临床试验中出现了红细胞毒性，另外还有些抗体表现出了T细胞毒性等。

因此，想要有效利用CD47-SIRPα这一信号来进行肿瘤免疫治疗，开发出只作用于肿瘤细胞而不影响正常细胞功能的高效低毒副作用的CD47抗体具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供安全有效的CD47结合分子。

为了开发出只作用于肿瘤细胞而不影响正常细胞功能的高效低毒副作用的CD47结合分子，本发明利用兔单细胞RT-PCR技术，从免疫后的兔子体内成功分离到一株低亲和力低解离能力、低毒(基本上不与红细胞结合)、但能高效促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的兔源CD47抗体，本发明中称为1C8。细胞水平实验表明，该抗体能高效阻断CD47与配体SIRPα结合，有效促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞，同时具有低红细胞毒性的特点，本发明的这株细胞具有重要的临床开发价值。在此基础上，本发明进一步提供了嵌合抗体及人源化抗体。