[发明专利]一种获得识别空间构象表位抗体的方法在审
| 申请号： | 202111247175.9 | 申请日： | 2021-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN113999306A | 公开（公告）日： | 2022-02-01 |
| 发明（设计）人： | 宋南;林坜桁 | 申请（专利权）人： | 杏联药业（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N15/13;C12N15/85;C12N15/62 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 闫书宁 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 获得 识别 空间 构象 抗体 方法 | ||
1.一种获得识别抗原蛋白空间构象表位抗体的方法，包括如下步骤：
(1)构建重组质粒；所述重组质粒表达抗原蛋白和表面锚定蛋白形成的融合蛋白；
(2)将步骤(1)构建的重组质粒转入真核细胞，筛选，获得重组真核细胞；
所述重组真核细胞表面展示抗原蛋白或抗原蛋白片段；
(3)采用步骤(2)获得的重组真核细胞免疫动物，获得杂交瘤细胞；
(4)从步骤(3)获得的杂交瘤细胞中分离抗体；该抗体即为识别抗原蛋白空间构象表位的抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，表面锚定蛋白为糖磷脂酰肌醇。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，真核细胞为Sp2/0-Ag14细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述抗原蛋白为CCN1蛋白。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述重组质粒为SEQ IDNO:1所示的融合序列和pOptiVEC-TOPO载体使用TA克隆法连接而成。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述识别CCN1蛋白空间构象表位抗体为单克隆抗体15G7；
所述单克隆抗体15G7由重链和轻链组成；
所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；
所述单克隆抗体15G7结合CCN1蛋白。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述筛选为甲氨蝶呤筛选。
8.采用权利要求1至7任一所述的方法获得的识别抗原蛋白空间构象表位抗体在筛选药物中的应用。
9.一种单克隆抗体15G7，由重链和轻链组成；
所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；
所述单克隆抗体15G7结合CCN1蛋白。
10.编码权利要求9所述单克隆抗体15G7的核酸分子，由编码所述重链的核酸分子和编码所述轻链的核酸分子组成；
所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
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