[发明专利]MSI2-Numb结合代谢分子测定胰腺癌进展的方法

说明书

MSI2‑Numb结合代谢分子测定胰腺癌进展的方法，所属检测技术领域，方法包括肿瘤组织切术阶段检测和血液预后阶段检测。肿瘤组织切术阶段检测包括肿瘤组织细胞预处理、测定肿瘤组织Musashi2、测定肿瘤组织Numb、测定血液代谢分子及判定；血液预后阶段检测包括测定血液Musashi2、测定血液Numb、测定血液代谢分子及预后；本发明提供MSI2‑Numb结合代谢分子测定胰腺癌进展的方法，能够通过测定Musashi2和Numb在胰腺癌组织中表达结合血液检测来进行胰腺癌病情进展筛查，能够客观评估肿瘤临床进展、耐药性及不良预后，有助于拟定最佳治疗方案，检测精度比现有检测方法提高20％。

技术领域

本发明属于医疗器械技术领域，具体涉及一种MSI2-Numb结合代谢分子测定胰腺癌进展的方法。

背景技术

胰腺癌是一种恶性程度极高且诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90％的胰腺癌起源于胰腺管上皮的导管胰腺癌，是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的临床确诊率很低，手术死亡率较高，并且其治愈率很低。胰腺癌的临床特点是发现疾病晚期、病程治疗短、病情发展快和迅速恶化。目前临床上缺乏胰腺癌早期筛查和诊断的技术，导致胰腺癌发现皆是晚期，诊疗效果极度有限。

其中，Musashi2(MSI2)和Numb在细胞不对称分裂，造血细胞及神经细胞系功能维持上起着重要作用。Musashi2(MSI2)和Numb在胰腺癌组织中表达存在显著相关性，两者联合能够客观反映胰腺癌患者的病情进展以及评估胰腺癌患者的预后。

为了提高胰腺癌的精准诊疗水平以及治愈率，如何对胰腺癌患者的病情进展及预后状态进行测定就显得尤为重要。

发明内容

针对现有技术中缺乏精确有效的胰腺癌肿瘤临床进展筛查和预后测定方法，本发明提供MSI2-Numb结合代谢分子测定胰腺癌进展的方法，能够通过测定Musashi2(MSI2)和Numb在胰腺癌组织中表达结合血液检测来进行胰腺癌病情进展筛查以及评估胰腺癌患者的预后，提高检测精度和准确率。其具体技术方案如下：

MSI2-Numb结合代谢分子测定胰腺癌进展的方法，包括如下步骤：

一、肿瘤组织切除阶段检测：

步骤1，肿瘤组织预处理：

将肿瘤组织用DEPC水冲洗，置于冻存管中-80℃冻存待测；取30～50mg肿瘤组织置1.5ml离心管中，加入1.5ml Trizol充分匀浆，室温静置10min；每管加入300μl氯仿，剧烈混匀30sec，静置20min，4℃，10000rpm离心15min；轻轻吸取上层液体400μl至另一新离心管中，加入等体积异丙醇，轻轻颠倒混匀，4℃10000rpm离心15min；弃上清，加入2ml 75％酒精洗涤沉淀物，4℃10000rpm离心15min；弃掉上清，室温下晾干10min，每管加入10μl无RNA酶水，在65℃溶解10～15min；

步骤2，测定肿瘤组织Musashi2：

将肿瘤组织进行预处理后，置于PCR反应体系，在PCR反应体系中加入荧光染料Sypro和热启动hTaq酶，所述的荧光染料Sypro能特异性地结合Musashi2而发出荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步；

所述的荧光染料Sypro的工作浓度为0.3×～1×，所述热启动hTaq酶的工作浓度为0.03～0.1U/μL；

所述的PCR反应体系还包括PCR缓冲液、荧光标记Cy5、dATP溶液、dGTP溶液、dCTP溶液、PCR保护剂、钙离子和无菌双蒸水；

所述PCR反应体系还包括8μmol/L正向引物，核苷酸序列为：AGGTTGAGCCATGCAGTCAT；

所述PCR反应体系还包括8μmol/L反向引物，核苷酸序列为：AGGTTGAGCCATGCAGTAGC；