[发明专利]一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子标记、检测方法及应用有效
| 申请号： | 202111248668.4 | 申请日： | 2021-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN113774153B | 公开（公告）日： | 2023-02-17 |
| 发明（设计）人： | 陈浩林;韩勇;杨洋;袁超;王德凤;粟朝芝;李冬光 | 申请（专利权）人： | 贵州省畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京盛询知识产权代理有限公司 11901 | 代理人： | 刘静 |
| 地址： | 550000 贵州*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 贵州 山羊 乐至 分子 标记 检测 方法 应用 | ||
1.一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示，且SEQ ID NO：1所示序列的第97位为G，第232位为C时，则为贵州黑山羊；第97位为T，第232位为T时，则为乐至黑山羊。
2.一种扩增权利要求1所述的分子标记的引物对，其特征在于，包括：
上游引物：5’-ACGAAGGCAACCAGAACCTG-3’；
下游引物：5’-CGCAATGATCCAGTCGTTCC-3’。
3.一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物对。
4.一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：以待鉴别黑山羊的基因组DNA为模板，利用权利要求2所述的引物对进行PCR扩增，所得扩增产物按照下述方法确定所述待鉴别黑山羊的品种：
若第97位为G，第232位为C，则判定为贵州黑山羊；若第97位为T，第232位为T，则判定为乐至黑山羊。
5.如权利要求4所述的鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子检测方法，其特征在于，25μL的PCR扩增反应体系包括：PCR混合液12 μL、上下游引物各1 μL、cDNA模板2 μL和双蒸馏水9 μL。
6.如权利要求4所述的鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子检测方法，其特征在于，PCR扩增反应程序为：在95 ℃预变性5 min；94 ℃持续40 s，53 ℃持续40 s，72 ℃持续50s，35个循环；在72 ℃延长10 min。
7.如权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂盒或权利要求4所述的分子检测方法在鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊中的应用。
8.如权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂盒或权利要求4所述的分子检测方法在贵州黑山羊和/或乐至黑山羊纯种繁殖与选育中的应用。
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