[发明专利]一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子标记、检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子标记、检测方法及应用，属于分子检测技术领域。本发明公开的分子标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，且SEQ ID NO：1所示序列的第97位为G，第232位为C时，则为贵州黑山羊；第97位为T，第232位为T时，则为乐至黑山羊。本发明通过分析INHBB基因在贵州黑山羊和乐至黑山羊中的基因差异，发现能够用于鉴别两个品种的多态性位点，并且基于该多态性位点通过所设计的引物对，实现对贵州黑山羊和乐至黑山羊的精准区别和鉴定，这为利用分子手段进行地方品种山羊纯种繁殖与选育具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域，特别是涉及一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子标记、检测方法及应用。

背景技术

随着肉羊产业的发展，对地方品种的纯种繁育需求量越来越大，贵州黑山羊和乐至黑山羊都属于西南地区特有的山羊品种，都属于国家畜禽品种资源中的地方山羊品种资源。贵州黑山羊和乐至黑山羊具有体形外貌相近的特点，但在山羊纯种繁殖与选育过程中需要用到对本地山羊种质资源的一些具有特殊功能的基因进行筛选与鉴定，特别是与山羊产羔率相关的功能基因进行精准选育。羊的育种包括纯种繁育和杂交两个方面，纯种繁育和杂交都需要纯的种羊，有了好的种羊，才能繁育出品质优良的后代。但是，目前用于繁殖和选育的过程中多采用传统的选育方法，比如：自然选育结合杂交方式进行纯繁和品种选育，这种繁殖选育方式需要周期长，并且不利于优势基因的保留，很难精准选择出性状优良的种羊和后代。随着分子技术的发展，分子技术已经应用到不同的领域，但是目前对于贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子鉴别技术还比较欠缺。因此，亟需一种能够精准鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子生物学方法，以解决上述存在的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子标记、检测方法及应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过所设计的引物对能够实现对贵州黑山羊和乐至黑山羊的精准区别和鉴定，对山羊纯种繁殖与选育具有重要的意义。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子标记，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示，且SEQ ID NO：1所示序列的第97位为G，第232位为C时，则为贵州黑山羊；第97位为T，第232位为T时，则为乐至黑山羊。

本发明还提供一种扩增所述的分子标记的引物对，包括：

上游引物：5’-ACGAAGGCAACCAGAACCTG-3’；

下游引物：5’-CGCAATGATCCAGTCGTTCC-3’。

本发明还提供一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的试剂盒，包括所述的引物对。

本发明还提供一种鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊的分子检测方法，包括以下步骤：以待鉴别黑山羊的基因组DNA为模板，利用所述的引物对进行PCR扩增，所得扩增产物按照下述方法确定所述待鉴别黑山羊的品种：

若第97位为G，第232位为C，则判定为贵州黑山羊；若第97位为T，第232位为T，则判定为乐至黑山羊。

优选的是，25 μL的PCR扩增反应体系包括：PCR混合液12 μL、上下游引物各1 μL、cDNA模板2 μL和双蒸馏水9 μL。

优选的是，PCR扩增反应程序为：在95 ℃预变性5 min；94 ℃持续40 s，53 ℃持续40 s，72 ℃持续50 s，35个循环；在72 ℃延长10 min。

本发明还提供所述的分子标记或所述的引物对或所述的试剂盒或所述的分子检测方法在鉴别贵州黑山羊和乐至黑山羊中的应用。

本发明还提供所述的分子标记或所述的引物对或所述的试剂盒或所述的分子检测方法在贵州黑山羊和/或乐至黑山羊纯种繁殖与选育中的应用。