[发明专利]一种用于检测固执腐霉的LAMP引物组合物及其检测方法有效
| 申请号： | 202111250136.4 | 申请日： | 2021-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN114317796B | 公开（公告）日： | 2022-11-25 |
| 发明（设计）人： | 陈佳佳;于健;简祖平;张圆圆;熊伟;徐翔;王剑;芮婷 | 申请（专利权）人： | 江苏农林职业技术学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷 |
| 地址： | 212499 江苏省镇江市句容市文*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 固执 lamp 引物 组合 及其 方法 | ||
1.一种用于检测固执腐霉的LAMP引物组合物，其特征在于，该引物组合物由以下引物组成: 如SEQ ID No.1所示的正向内引物FIP，如SEQ ID No.2所示的反向内引物BIP，如SEQID No.3所示的正向外引物F3，如SEQ ID No.4所示的反向外引物B3，如SEQ ID No.5所示的正向环引物LF，如SEQ ID No.6所示的反向环引物LB。
2.权利要求1所述的LAMP引物组合物在检测固执腐霉中的应用，所述的检测为非疾病诊断为目的的检测。
3.权利要求1所述的LAMP引物组合物在制备用于检测固执腐霉试剂盒中的应用。
4.一种用于检测固执腐霉的LAMP试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包含权利要求1所述的LAMP引物组合物。
5.根据权利要求4所述的用于检测固执腐霉的LAMP试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包含ThermoPol Buffer，MgS04，dNTPs，甜菜碱，Bst DNA polymerase，羟基萘酚蓝。
6.权利要求4或5所述的LAMP试剂盒在检测固执腐霉中的应用，所述的检测为非疾病诊断为目的的检测。
7.一种固执腐霉的LAMP检测方法，其特征在于提取待检微生物DNA，取DNA溶液作为反应模板，以权利要求1所述的引物组合物进行LAMP反应，然后观察扩增产物的颜色变化，若呈天蓝色表示检测结果为阳性，存在固执腐霉，若呈紫色表示检测结果为阴性，不存在固执腐霉；所述的LAMP反应体系：2.5μL 10×ThermoPol Buffer，8mmol·L-1MgS04，1.2 mmol·L-1dNTPs，内引物FIP和BIP各1.6μmol·L-1，外引物F3和B3各0.4μmol·L-1，环引物LF和LB各0.8μmol·L-1，0.8 μmol·L-1甜菜碱，8U·μL-1Bst DNA polymerase，180mmol·L-1羟基萘酚蓝，2μL模板DNA，体系共计26μL。
8.根据权利要求7所述的LAMP检测方法，其特征在于所述LAMP反应的程序为：63℃反应扩增60min。
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