[发明专利]一种大蒜病毒的多重PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种大蒜病毒的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，包括SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5组引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1~10所示；

所述大蒜病毒为葱潜隐病毒SLV、大蒜普通潜隐病毒GCLV、韭葱黄条病毒LYSV、洋葱黄矮病毒OYDV和青葱X病毒属Allexivirus病毒中的至少一种。

2. 根据权利要求1所述多重PCR检测试剂盒，其特征在于，SLV、GCLV、LYSV、OYDV、Allexiviruses引物对的摩尔比为6~72: 6~48: 6: 6: 6~96。

3.根据权利要求1所述多重PCR检测试剂盒，其特征在于，SLV、GCLV、LYSV、OYDV、Allexiviruses引物对的摩尔比为10:8:3:3:16。

4.根据权利要求1所述多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照、阴性对照、缓冲液、PCR酶或水中的一种或几种的组合。

5.根据权利要求1所述多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述引物对预混为试剂P。

6.一种检测大蒜中葱潜隐病毒SLV、大蒜普通潜隐病毒GCLV、韭葱黄条病毒LYSV、洋葱黄矮病毒OYDV和青葱X病毒属病毒Allexivirus的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）按照SEQ ID NO:1~10所示的核苷酸序列合成SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5组引物对；

（2）提取待测样品中的RNA并反转录获得cDNA；

（3）以cDNA为模板，以步骤（1）中的引物对为引物进行PCR反应，获得PCR产物；

（4）将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；

（5）根据电泳条带进行判断：出现592 bp条带含有SLV，出现431 bp条带含有GCLV，出现338 bp条带含有LYSV，出现265 bp条带含有OYDV，出现190 bp条带含有Allexiviruses。

7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses引物对的摩尔比为6~72: 6~48: 6: 6: 6~96。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的退火温度为54.0-60.0℃。