[发明专利]一种大蒜病毒的多重PCR检测试剂盒

说明书

本发明属于植物病毒检测技术领域，提供了一种大蒜病毒的多重PCR检测试剂盒，包括SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5组引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1~10所示。所述大蒜病毒为葱潜隐病毒SLV、大蒜普通潜隐病毒GCLV、韭葱黄条病毒LYSV、洋葱黄矮病毒OYDV和青葱X病毒属Allexivirus病毒中的至少一种。本发明提供的大蒜病毒检测试剂盒，能够通过一次PCR反应同时检测葱潜隐病毒SLV、大蒜普通潜隐病毒GCLV、韭葱黄条病毒LYSV、洋葱黄矮病毒OYDV和青葱X病毒属病毒等12种侵染我国大蒜的病毒，提高了检测效率，降低检测成本。本发明所用引物特异性强、目的条带大小分布合理，在保证检测结果准确性的同时，能够有效地鉴别侵染病毒的种类。

技术领域

本发明属于植物病毒检测技术领域，具体涉及一种检测大蒜病毒的引物及其组成的试剂盒。

背景技术

大蒜是我国重要的传统特色蔬菜和出口创汇蔬菜，占世界大蒜贸易总额的70%。大蒜属于无性繁殖作物，只能通过分瓣或形成气生鳞茎的方式进行无性繁殖，因此导致病毒病积累十分严重。张维等和明艳林等分别对黑龙江省和厦门市的大蒜病毒病发病情况进行了调查，发现大蒜均普遍受到病毒的复合侵染。2016年至2017年，发明人对江苏徐州和河南部分地区大蒜病毒发生情况的调查也发现，生产上大蒜病毒病发病率为100%，且普遍受到两种及以上病毒复合侵染，表现的病毒病症状包括花叶、植株矮缩、畸形等。

利用组织培养技术脱除病毒是恢复大蒜品种种性、提高鳞茎产量和品质的有效手段，国内外已有大量的研究报道和实践应用。而病毒脱除成功与否，需要通过检测技术进行验证。目前常用的植物病毒检测方法中，PCR方法因其特异性强、灵敏度高、操作简便等优势，成为当前植物病毒检测的首选方法。

已报道的侵染我国大蒜的病毒可划分为3个属，包括香石竹潜隐病毒属（葱潜隐病毒SLV和大蒜普通潜隐病毒GCLV）、马铃薯Y病毒属（韭葱黄条病毒LYSV和洋葱黄矮病毒OYDV）和青葱X病毒病毒属（GarVA、GarVB、GarVC、GarVD、GarVE、GarVX、GarMBFV和ShVX）。胡新喜等曾公布了一种四重RT-PCR检测大蒜病毒的方法，该方法利用四组引物可以同时检测葱潜隐病毒（SLV）、韭葱黄条病毒（LYSV）、洋葱黄矮病毒（OYDV）和青葱X病毒属（Allexivirus）病毒；S. Majumder和V.K. Baranwal也公开发表了一种能够同时检测和鉴定SLV、GCLV、OYDV和Allexiviruses的多重RT-PCR方法。同时利用上述两种方法对徐州地区大蒜病毒病进行检测，发现SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexivirus均有检出。然而，现有文献中报道的引物在同一体系中扩增时，或者有杂带影响，或者有的目的条带间间隔太小，容易引起误判。因此，为了提高大蒜病毒检测效率、降低检测成本，需要建立一种能够同时检测上述大蒜病毒的多重PCR方法。

发明内容

针对现有技术中的问题，本发明提供一种检测多种大蒜病毒的试剂盒，各条带分布合理，易于分辨，可同时检测葱潜隐病毒SLV、大蒜普通潜隐病毒GCLV、韭葱黄条病毒LYSV、洋葱黄矮病毒OYDV和青葱X病毒属病毒等12种病毒。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种大蒜病毒的多重PCR检测试剂盒，包括SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5组引物对，所述引物对的核苷酸序列如下：

SLV-F：5'-GAGCGAAAGTAGATTCAACAAAC-3'（SEQ ID NO:1），

SLV-R：5'-CCTTATCAGACCCTCAAGTGGT-3'（SEQ ID NO:2）；

GCLV-F：5'-GCTAAGCGGTTTTTGGAGCG-3'（SEQ ID NO:3），