[发明专利]一种多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法及其系统

权利要求书

1.一种多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1：选择二维分离模式，搭建二维液相色谱平台，包括第一维离子交换液相色谱和第二维反相液相色谱；

步骤S2：牛奶通过所述二维液相色谱平台分离得到肠毒素C。

2.根据权利要求1所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，第一维离子交换液相色谱中，色谱柱为阳离子交换色谱柱。

3.根据权利要求1所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，第一维离子交换液相色谱中，流动相pH为4.5～5.5。

4.根据权利要求1所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，第一维离子交换液相色谱中，肠毒素C在第一维色谱柱的洗脱位置为35～40min。

5.根据权利要求1所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，第一维离子交换液相色谱中，洗脱条件为：

流动相：A相：20mM K2HPO4(pH＝5.3)+10％ACN；B相：20mM K2HPO4(pH＝5.3)+10％ACN+1M NaCl；

洗脱条件：0～10min 0％B相，20～30min 8％～9％B相，30.1～50min 25％～26％B相，70～100min 100％B相，100～120min 0％B相；

流速：1mL/min；

检测波长：215nm。

6.根据权利要求1所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，第二维反相液相色谱中，色谱柱为C8色谱柱。

7.根据权利要求1所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，第二维反相液相色谱中，肠毒素C在第二维色谱柱的洗脱位置为24～26min。

8.根据权利要求1所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，第二维反相液相色谱中，洗脱条件为：

流动相：A相：乙腈-水(5％+95％，0.1％TFA)；B相：乙腈(0.1％TFA)；

洗脱条件：0～2min 5％B相，5～60min 33％～38％B相，60.1～90min 95％B相，90～120min 0％B相；

流速：0.2mL/min；

检测波长：215nm。

9.一种多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的系统，采用如权利要求1-8中任一项所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，其特征在于，包括第一维液相色谱柱、第二维液相色谱柱、捕集柱和六通阀切换装置；其中的第一维液相色谱柱、捕集柱与第二维液相色谱柱通过六通阀切换装置连接。

10.根据权利要求9所述的多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的系统，其特征在于，第一个六通阀的第一接口连接注射器，第一个六通阀的第二接口和第五接口连接进样环，第一个六通阀的第三接口连接第一维液相色谱柱，第一个六通阀的第四接口连接第一维色谱泵，第一个六通阀的第六接口通废液；第一维色谱柱与紫外检测器相连，并与第二个六通阀的第四接口相连，第二个六通阀的第三接口通废液，第二个六通阀的第二接口和第五接口连接捕集柱，第二个六通阀的第六接口与第二维反相色谱柱相连，第二个六通阀的第一接口连接第二维色谱泵。