[发明专利]一种多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法及其系统

说明书

本发明公开了一种多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法及其系统，其中方法包括以下步骤：步骤S1：选择二维分离模式，搭建二维液相色谱平台，包括第一维离子交换液相色谱和第二维反相液相色谱；步骤S2：牛奶通过二维液相色谱平台分离得到肠毒素C。本发明选择离子交换色谱与反相色谱的二维分离模式，借助于第一维离子交换色谱的快速分离，对牛奶基质进行一次预分离，通过中心切割法收集含有肠毒素目标分子的馏分，再经第二维反相色谱分析，可大大降低被分析组分在反相柱中的复杂性，从而提高其分离效率和灵敏度。

技术领域

本发明涉及食品安全微生物检测技术领域，具体涉及一种多维液相色谱分离牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素C的方法及其系统。

背景技术

金黄色葡萄球菌肠毒素C是由金黄色葡萄球菌分泌的一种毒素，也是最常见的导致金黄色葡萄球菌食物中毒的五种经典肠毒素之一，因此对肠毒素C进行检测有利于保障食品安全健康，预防食物中毒事件发生。国家标准GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》中采用酶联免疫吸附试验法(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测肠毒素，但该方法易受食品基质干扰，存在不同肠毒素间存在交叉反应，易导致假阳性、假阴性结果。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种肠毒素C的分离方法，为开发一种肠毒素C的新型检测方法奠定基础。

发明内容

第一方面，本发明针对现有技术的上述缺陷，提供一种多维液相色谱分离牛奶中肠毒素C的方法，包括以下步骤：

步骤S1：选择二维分离模式，搭建二维液相色谱平台，包括第一维离子交换液相色谱和第二维反相液相色谱；

步骤S2：牛奶通过所述二维液相色谱平台分离得到肠毒素C。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，色谱柱为阳离子交换色谱柱。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，流动相pH为4.5～5.5。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，肠毒素C在第一维色谱柱的洗脱位置为35～40min。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，洗脱条件为：

流动相：A相：20mM K2HPO4(pH＝5.3)+10％ACN；B相：20mM K2HPO4(pH＝5.3)+10％ACN+1M NaCl；

洗脱条件：0～10min 0％B相，20～30min 8％～9％B相，30.1～50min 25％～26％B相，70～100min 100％B相，100～120min 0％B相；

流速：1mL/min；

检测波长：215nm。

优选地，第二维反相液相色谱中，色谱柱为C8色谱柱。

优选地，第二维反相液相色谱中，肠毒素C在第二维色谱柱的洗脱位置为24～26min。

优选地，第二维反相液相色谱中，洗脱条件为：

流动相：A相：乙腈-水(5％+95％，0.1％TFA)；B相：乙腈(0.1％TFA)；

洗脱条件：0～2min 5％B相，5～60min 33％～38％B相，60.1～90min 95％B相，90～120min 0％B相；

流速：0.2mL/min；

检测波长：215nm。