[发明专利]一种基于复合水凝胶的干细胞与胰岛β细胞共培养方法

权利要求书

1.一种基于复合水凝胶的干细胞与胰岛β细胞共培养方法，其特征在于，具体操作步骤如下：

(1)、以小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞为模型，用含20％(v/v)牛血清、1M HEPES及50μβ-巯基乙醇的DMEM高糖培养基进行培养，得MIN6细胞；

(2)、将灭菌后的复合水凝胶材料用PBS清洗浸泡，再转移至新的含20％(v/v)牛血清、1M HEPES及50μβ-巯基乙醇的DMEM高糖培养基中浸泡过夜；

(3)、将预备的MSC细胞与MIN6细胞以不同比例混匀，后以直接接触的共培养方式将含有MSC细胞与MIN6细胞的混合悬液均匀分布在浸泡过的复合水凝胶材料的表面；

(4)、将步骤(3)中表面分布有混合悬液的复合水凝胶材料置于培养箱中，培养细胞过夜，待细胞贴壁后添加培养基；同时，设置二维平面细胞培养，即培养皿平板培养条件为对照组；

将两种培养模式的细胞置于培养箱内培养7天后，利用倒置显微镜观察MSC细胞与MIN6细胞共培养后自发形成的多细胞球形貌。

2.根据权利要求1所述的一种基于复合水凝胶的干细胞与胰岛β细胞共培养方法，其特征在于，

在步骤(1)中，所述MIN6细胞的培养条件是：在温度37℃、5％CO2的环境下进行常规培养。

3.根据权利要求1所述的一种基于复合水凝胶的干细胞与胰岛β细胞共培养方法，其特征在于，

在步骤(2)中，所述复合水凝胶材料的制备步骤具体如下；

(2.1)、将成分A、成分B及交联/引发体系溶解于PBS中，50℃使其溶解，得到溶液一；

(2.2)、将溶液一注入透明模具中，在常温室温、405nm波长的可见光照射下实施聚合反应，得到具有互穿网络的凝胶一；

(2.3)、将MIN6细胞以1-3×105个细胞/100μl的浓度同时添加不同比例的MSC细胞共同接种于凝胶一的表面进行培养，从而获得多细胞三维模型。

4.根据权利要求3所述的一种基于复合水凝胶的干细胞与胰岛β细胞共培养方法，其特征在于，

所述成分A是抗细胞粘附组分，包括聚乙二醇二丙烯酸酯；

成分B是促细胞粘附组分，包括明胶甲基丙烯酰基；

所述成分A与成分B的质量比是1：2-1：10；

通过调控成分A与成分B之间的比例对细胞粘附密度进行定标。

5.根据权利要求1所述的一种基于复合水凝胶的干细胞与胰岛β细胞共培养方法，其特征在于，其特征在于，

在步骤(3)中，所述MSC细胞与MIN6细胞的浓度比是：1：5-1:50。

6.根据权利要求1所述的一种基于复合水凝胶的干细胞与胰岛β细胞共培养方法，其特征在于，其特征在于，

在步骤(3)中，所述MIN6细胞的浓度是1-3×10⁵个细胞/100ul。