[发明专利]一种基于可视化LAMP技术检测桔小实蝇的方法及应用在审
| 申请号： | 202111265477.9 | 申请日： | 2021-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN114134235A | 公开（公告）日： | 2022-03-04 |
| 发明（设计）人： | 董兆克;褚栋;刘利君 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 盛君梅 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 可视化 lamp 技术 检测 桔小实蝇 方法 应用 | ||
1.一种基于可视化LAMP技术检测桔小实蝇的方法，其特征在于，包括：
1)以桔小实蝇线粒体COI基因中的含有多态性变异位点的区段为靶基因，设计特异性LAMP引物组；
2)利用所述特异性LAMP引物组，以待测样本的全基因组DNA为底物，进行LAMP反应；
3)所述LAMP反应结束后，根据检测用核酸染料的显色结果判断待测样本是否为桔小实蝇。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性LAMP引物组由核苷酸序列为SEQID NO:2的F3引物、核苷酸序列为SEQ ID NO:3的B3引物，核苷酸序列为SEQ ID NO:4的FIP引物，以及核苷酸序列为SEQ ID NO:5的BIP引物组成。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LAMP反应的条件为：63℃40-60min，85℃灭活5min。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，反应体系中聚合酶为Bst DNA大片段聚合酶。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测用核酸染料为钙黄绿素或SYBRGreenI，优选为SYBR Green I。
7.一种用于可视化检测桔小实蝇的LAMP引物组，其特征在于，由核苷酸序列为SEQ IDNO:2的F3引物、核苷酸序列为SEQ ID NO:3的B3引物，核苷酸序列为SEQ ID NO:4的FIP引物，以及核苷酸序列为SEQ ID NO:5的BIP引物组成。
8.一种用于可视化检测桔小实蝇的试剂盒，其特征在于，包含有如权利要求7所述的引物组的试剂，以及检测用核酸染料；优选地，所述检测用核酸染料为SYBR GreenI。
9.如权利要求1-6中任一项所述的方法、权利要求7所述的LAMP引物组、或者如权利要求8所述的试剂盒在生物检疫中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述生物检疫中以实蝇幼虫或实蝇成虫为生物检材。
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