[发明专利]一种白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白的纯化贮存方法

权利要求书

1.一种白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白的纯化贮存方法，其特征在于：用洗脱液洗脱白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白，将纯化后的白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白换液保存于贮存液中；其中，

所述白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白由人白细胞介素-15、人白细胞介素-15受体以及表皮生长因子受体抗体三种蛋白融合而成；

所述洗脱液的组成为：

0.08～0.15M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和240～260mM蔗糖，pH3.0；

所述贮存液的组成为：

0.08～0.15M柠檬酸钠和0.1M～0.2M氯化钠，pH 6.0；

或0.08～0.15M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和240～260mM蔗糖，pH 6.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述洗脱液的组成为0.1M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和250mM蔗糖，pH 3.0。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述贮存液的组成为0.1M柠檬酸钠和0.1M～0.2M氯化钠，pH 6.0；或0.1M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和250mM蔗糖，pH 6.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：以偶联于2-10％琼脂糖的Protein A为亲和填料。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：加入洗脱液于20-30℃孵育5-10min后洗脱融合蛋白。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：洗脱液洗脱白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白后，用中和液进行中和，所述中和液为0.8-1.2M Tris-HCl，pH8.9。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：中和后融合蛋白溶液的pH为5.0-6.0。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：换液保存于贮存液中时，3500-4500rpm离心浓缩白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白后加入贮存液。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法具体包括以下步骤：

(1)用磷酸盐缓冲液清洗Protein A亲和填料，向层析柱中加入待纯化的白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白上清液，再次用磷酸盐缓冲液漂洗Protein A亲和填料；

(2)向层析柱中加入洗脱液，20-30℃孵育5-10min后，洗脱白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白，向洗脱后的白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白中加入中和液；

(3)对步骤(2)得到的融合蛋白溶液离心得到融合蛋白浓缩液，加入贮存液，继续离心，使白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白处于贮存液中。

10.权利要求1-9任一项所述的方法纯化后的白细胞介素15及其受体-单克隆抗体融合蛋白。