[发明专利]引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法及应用

说明书

本发明公开了引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法及应用，涉及干细胞技术领域。引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法包括：在培养多能干细胞的培养基中加入rapamycin持续培养。通过在多能干细胞(如人类胚胎干细胞)培养中加入rapamycin，可以引导多能干细胞成为类似自然状态下发育停滞的细胞，有利于防止特殊情况下多能干细胞过度增殖，为人类多能干细胞更多应用提供了新的思路，并且可以提高细胞生产的效率；有利于根据需要获得特定发育程度的多能干细胞，为人多能干细胞的应用提供了更多可能。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，具体而言，涉及引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法及应用。

背景技术

人类多能干细胞(hPSC)可以分化为我们体内的所有细胞类型，并且是研究人类胚胎发育的重要模型系统。hPSC分化产生的特定细胞类型在细胞治疗，药物筛选和疾病模型研究中起着重要作用。可见，人多能干细胞为再生和修复多种组织和药物筛选提供了材料。

人多能干细胞不同发育程度的细胞均具有治疗应用价值，获取特定发育程度的人多能干细胞操作难度是非常大的。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法，旨在使多能干细胞成为类似自然状态下发育停滞的细胞，为多能干细胞的应用提供了更多可能。

本发明的另一目的在于提供一种获取多能干细胞的方法，其能够获取特定发育程度的多能干细胞。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法，包括：在培养多能干细胞的培养基中加入rapamycin。

在可选的实施方式中，rapamycin在培养基中的浓度为20-200nM；优选为50-100nM。

在可选的实施方式中，多能干细胞为人多能干细胞。

在可选的实施方式中，人多能干细胞选自人类胚胎干细胞或人类诱导多能干细胞。

在可选的实施方式中，人多能干细胞的培养是在添加有rapamycin的E8培养基中进行培养的。

在可选的实施方式中，E8培养基的成分包括DMEM/F12培养基、L-抗坏血酸-2-磷酸镁、硒酸钠、转铁蛋白、胰岛素、碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β。

在可选的实施方式中，在E8培养基中，L-抗坏血酸-2-磷酸镁的浓度为60-70mg/L，硒酸钠的浓度为12-16μg/L，转铁蛋白的浓度为8-12mg/L，胰岛素的浓度为18-22mg/L，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为90-110μg/L，转化生长因子-β的浓度为1-3μg/L。

第二方面，本发明提供一种获取多能干细胞的方法，其采用前述实施方式中任一项的方法引导人类多能干细胞成为发育停滞的细胞。

在可选的实施方式中，停止培养之后，采用培养基将得到的细胞进行润洗。

在可选的实施方式中，采用E8培养基对得到的细胞润洗至少2次。

本发明具有以下有益效果：发明人通过在多能干细胞(如人多能干细胞)培养中加入rapamycin，可以引导多能干细胞成为类似自然状态下发育停滞的细胞，有利于防止特殊情况下多能干细胞过度增殖，为人类多能干细胞更多应用提供了新的思路，并且可以提高细胞生产的效率；有利于根据需要获得特定发育程度的多能干细胞，为人多能干细胞的应用提供了更多可能。

附图说明