[发明专利]利用单碱基基因编辑技术突变OsWaxy基因改良水稻直链淀粉含量的方法

权利要求书

1.靶向OsWaxy基因的单碱基基因编辑载体，其特征在于，所述载体包含腺嘌呤碱基编辑器和靶向OsWaxy基因的特异性核酸酶；

OsWaxy基因编码的蛋白在NCBI上的参考序列编号为XP_015644490.1。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述特异性核酸酶选自CRISPR/Cas9、CRISPR/Cas12a、TALEN、Meganuclease和ZFN中的任一种。

3.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述载体是基于CRISPR/Cas9的腺嘌呤碱基编辑载体，所述载体至少包含第一表达盒和第二表达盒；

其中，第一表达盒为ecTadA-ecTadA*7.10-nCas9r表达盒；所述第一表达盒包含的核酸构建体ecTadA-ecTadA*7.10-nCas9的序列如SEQ ID NO:3所示；

第二表达盒为sgRNA表达盒，且sgRNA作用位点位于OsWaxy基因的外显子上。

4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，sgRNA作用位点的DNA序列选自如下①～⑤中的任一个：

①5′-CATCGACCATCCGTCATTCC-3′；

②5′-ATCCACAACATCTCCTACCA-3′；

③5′-TCGGCAGGCTGGAGGAACAG-3′；

④5′-GACACTGGAGTTGATTACAA-3′；

⑤5′-TCGTCAACGGCATGGACGTC-3′。

5.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述第一表达盒由甘蔗Ubi4启动子驱动，所述第二表达盒由水稻U3启动子驱动。

6.权利要求1-5任一项所述载体在水稻育种和品种改良中的应用，其中，育种目的为改良水稻直链淀粉含量。

7.利用单碱基基因编辑技术突变OsWaxy基因改良水稻直链淀粉含量的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1-5任一项所述载体导入水稻中。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述水稻为籼稻。

9.OsWaxy蛋白突变体，其特征在于，所述突变体包含如下a～f突变中的任一种：

a.OsWaxy蛋白第166位氨基酸由D到G的突变；

b.OsWaxy蛋白第167位氨基酸由H到R的突变；

c.OsWaxy蛋白第265位氨基酸由N到S的突变；

d.OsWaxy蛋白第191位氨基酸由Y到H的突变；

e.OsWaxy蛋白第353位氨基酸由N到D的突变；

f.OsWaxy蛋白第353位氨基酸由N到S的突变；

其中，OsWaxy蛋白在NCBI上的参考序列编号为XP_015644490.1。

10.改良水稻直链淀粉含量的方法，其特征在于，所述方法包括：利用基因工程手段，在水稻基因组中引入突变，使其编码的OsWaxy蛋白包含D166G、H167R、Y191H、N265S、N353D或N353S突变位点；

其中，OsWaxy蛋白在NCBI上的参考序列编号为XP_015644490.1。