[发明专利]一种低温型烟草根系促生微生物功能菌剂

权利要求书

1.一种低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：

S1:取烟草根际土壤加入无菌水，震荡静置后获得细菌收集液；

S2:将所述细菌收集液涂布于羧甲基纤维素培养基和木质素选择培养基上分别进行筛选培养分别获得耐冷纤维素降解假单胞菌和耐冷木质素降解寡养单胞菌；

S3:将所述耐冷纤维素降解假单胞菌和耐冷木质素降解寡养单胞菌分别接种至LB液体培养基中进行扩大培养获得耐冷纤维素降解假单胞菌液和耐冷木质素降解寡养单胞菌液；

S4:将所述耐冷纤维素降解假单胞菌液和耐冷木质素降解寡养单胞菌液经浓度调节后按照1：0.5-2的体积比进行混合获得低温型烟草根系促生微生物功能菌剂。

2.根据权利要求1所述的低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中的震荡静置过程具体为：震荡1-3h后静置30-40min。

3.根据权利要求1所述的低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中的羧甲基纤维素培养基为:CMC-Na 15.0g，(NH₄)₂·SO₄ 1.0g，酵母膏1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，KH₂PO₄ 1.0g，NaCl 0.3g，琼脂15-20g，补加蒸馏水至1000mL，121℃高压蒸汽灭菌20min；

所述获得耐冷纤维素降解假单胞菌的筛选培养具体过程为：在温度为10-14℃条件下培养30-36h。

4.根据权利要求1所述的低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中的木质素选择培养基：蛋白胨1.0g，碱性木质素3.0g，NaCl 5.0g，pH值自然，琼脂15-20g，补加蒸馏水至1000mL，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌20min；

所述获得耐冷木质素降解寡养单胞菌的筛选培养具体过程为：在温度为12-15℃条件下培养32-38h。

5.根据权利要求1所述的低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中的LB液体培养基为：蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g、琼脂15-20g、补加蒸馏水至1000mL，pH值7.0-7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min。

6.根据权利要求1所述的低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述耐冷纤维素降解假单胞菌扩大培养的过程具体为：

将耐冷纤维素降解假单胞菌按照接种量为2-6％进行接种，在初始pH为7.0，温度10-14℃、转速150-200rpm条件下摇床震荡培养30-36h，培养至对数生长期，获得耐冷纤维素降解假单胞菌种子液，菌浓为1.0×10⁸～2.0×10⁹CFU/mL，并接种于新的LB液体培养基中，进行发酵获得耐冷纤维素降解假单胞菌液。

7.根据权利要求1所述的低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述耐冷木质素降解寡养单胞菌扩大培养的过程具体为：

将耐冷木质素降解寡养单胞菌按照接种量为2-5％进行接种，在初始pH为7.2，温度12-15℃、转速150-180rpm条件下摇床震荡培养32-38h，培养至对数生长期，获得耐冷纤维素降解假单胞菌种子液，菌浓为1.0×10⁸～2.0×10⁹CFU/mL，并接种于新的LB液体培养基中，进行发酵获得耐冷木质素降解寡养单胞菌液。

8.根据权利要求1所述的低温型烟草根系促生微生物功能菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中浓度调节过程具体为：将所述耐冷纤维素降解假单胞菌液和耐冷木质素降解寡养单胞菌液分别经离心收集菌体细胞，并采用磷酸盐缓冲液重新悬浮获得浓度为OD₆₀₀＝1.0±0.05。

9.一种低温型烟草根系促生微生物功能菌剂，其特征在于，所述微生物功能菌剂由权利要求1-8任意所述的制备方法获得。