[发明专利]一种人T淋巴细胞的慢速冻存方法

权利要求书

1.一种人T淋巴细胞的置核冻存方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)将包含人T淋巴细胞与细胞冻存液的冻存管置于-5℃～-10℃冷却剂中冷却；

(2)用经液氮预冷的金属接触所述冻存管的管壁对侧，接触3～5秒进行置核；

(3)将所述冻存管置于所述冷却剂中平衡；

(4)将所述冻存管移至低温设备中，以5～50℃/min的速率降温至-50℃～-55℃后，将所述冻存管转移至液氮中储存。

2.如权利要求1所述的置核冻存方法，其特征在于，

步骤(1)中，所述冷却剂为异丙醇；和/或，

步骤(4)中，以15～35℃/min的速率降温至-50℃。

3.如权利要求1所述的置核冻存方法，其特征在于，

步骤(1)中，将包含人T淋巴细胞与细胞冻存液的冻存管置于-5℃中冷却；和或，步骤(4)中，以25～35℃/min的速率降温至-50℃。

4.如权利要求1所述的置核冻存方法，其特征在于，

步骤(1)中，所述细胞冻存液为：4％HSA、1％甘油，以及0.1M海藻糖；或，

4％HSA、1％DMSO，以及0.1M海藻糖；或，

4％HSA以及0.2～0.3M海藻糖。

5.如权利要求4所述的置核冻存方法，其特征在于，步骤(1)中，所述细胞冻存液为：

4％HSA以及0.2M海藻糖；或，

4％HSA以及0.3M海藻糖。

6.如权利要求1所述的置核冻存方法，其特征在于，还包括：

步骤(1)中，将所述冻存管置于冷却剂中冷却至同温，所述冷却剂为异丙醇；

步骤(2)中，将所述冻存管移至异丙醇的液面上方1cm处；

步骤(3)中，将所述冻存管移至所述异丙醇中，平衡1分钟；

步骤(4)中，将所述冻存管降温后平衡3分钟，将所述冻存管转移至液氮中储存。

7.如权利要求1所述的置核冻存方法，其特征在于，

所述低温设备为程序降温仪，例如Thermo Fisher Scientific 7453；和/或，所述金属为镊子或铜线；和/或，所述冻存管为1.2ml的冻存管、0.5ml的EP管或经打孔优化传热的2.5ml的冻存管。

8.如权利要求1～7任一项所述的置核冻存方法，其特征在于，所述冻存管中含由0.5ml细胞冻存液保存的0.5～2×10⁷个T淋巴细胞。

9.一种细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液包括4％HSA、1％甘油，以及0.1海藻糖；或，

4％HSA、1％DMSO，以及0.1M海藻糖；或，

4％HSA以及0.2～0.3M海藻糖；

优选地，所述细胞冻存液为4％HSA以及0.2M海藻糖，或4％HSA以及0.3M海藻糖。

10.如权利要求9所述的细胞冻存液在制备免疫细胞置核冻存的试剂中的应用。