[发明专利]一种发酵生产L-丝氨酸的方法

权利要求书

1.一种发酵生产L-丝氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将L-丝氨酸生产菌的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养的温度为28-32℃，pH为6.8-7.2，溶氧为20-40％，搅拌转速150-250rpm；发酵培养至发酵液稀释100倍后的OD₆₀₀值为0.40-0.60时，降温至27-29℃，向体系中加入IPTG进行诱导培养，诱导培养48-52h；

培养过程中监测体系的残糖含量，当体系的残糖含量≤1.0g/L时开始添加补料，通过流加补料使体系中的葡萄糖浓度保持在0.5-1.0g/L；所述补料中含有葡萄糖60-80g/L、糖蜜40-60ml/L、叶酸0.3-0.5g/L；

(2)将诱导培养后的培养物进行破菌处理，分离收集上清，即生产得到含有L-丝氨酸的培养液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述L-丝氨酸生产菌由如下方法构建而成：

将大肠杆菌中的gpmA、sdaA、mtfA、pta、glyA、sdaC、serA、sstT、tdcC、aceA和cycA基因敲除，获得大肠杆菌工程菌；

将serB基因用sphⅠ和AaaI酶切处理，将serC基因用NcoⅠ和BglⅡ酶切处理，将酶切处理后的serB基因和serC基因整合到质粒PQE-N上，获得第一重组表达载体；

将pGEX-kan质粒用ecoNⅠ和ZraⅠ双酶切，再将serAΔ197基因整合到双酶切处理后的质粒pGEX-kan上，获得第二重组表达载体；

将获得的第一重组表达载体和第二重组表达载体导入到大肠杆菌工程菌中，即构建得到L-丝氨酸生产菌。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，serB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；serC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；质粒PQE-N的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；第一重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；pGEX-kan质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；serAΔ197基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；第二重组表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，L-丝氨酸生产菌的种子液的接入量为发酵培养基重量的10-15％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述发酵培养基的组成为：糖蜜40ml/L、葡萄糖30g/L、玉米浆干粉30g/L、磷酸二氢钾2g/L、柠檬酸0.5g/L、(NH₄)₂SO₄ 5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、MnSO₄ 0.08g/L、FeSO₄ 0.06g/L、维生素B₁ 0.025g/L、生物素3mg/L、卡那霉素50ppm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，加入IPTG，使IPTG在体系中的终浓度为0.5mmol/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述补料中含有葡萄糖70g/L、糖蜜50ml/L、叶酸0.4g/L。