[发明专利]钆塞酸二钠异构体的分离及其在作为MR成像对比剂中的应用

说明书

本发明公开了一种钆塞酸二钠异构体的分离及其在作为MR成像对比剂中的应用。所述钆塞酸二钠异构体A的分离方法，包括如下步骤：S1、采用反相HPLC分离钆塞酸二钠，得到含有钆塞酸二钠异构体A的洗脱液；S2、对含有钆塞酸二钠异构体A的洗脱液进行浓缩，得到含有钆塞酸二钠异构体A的浓缩液；S3、含有钆塞酸二钠异构体A的浓缩液经低温冻结后进行冷冻干燥，得到白色固体粉末状的钆塞酸二钠异构体A，并储存于真空玻璃瓶中。经本发明实验发现，Gd‑A较Gd‑B的成像效率更高、在兔和犬体内半衰期更短，进一步降低了钆在体内沉积的风险，因此纯化Gd‑A有潜在的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及一种钆塞酸二钠异构体的分离及其在作为MR成像对比剂中的应用，属于核共振对比剂技术领域。

背景技术

钆塞酸二钠(Gd-EOB-DTPA，商品名：普美显)，是肝脏特异性对比剂，通过在钆喷酸葡甲胺盐(Gd-DTPA)分子结构上增加脂溶性基团(EOB)而得到，其分子结构同时具有亲水性和亲脂性，从而具有肝、肾双通路排泄的特征。Gd-EOB-DTPA 能够被肝细胞基底外侧膜内的有机阴离子转运蛋白(Organic Anion Transporting Peptides，OATPs)特异性摄取进入肝细胞内，并通过胆道系统以药物原型随粪便排出体外。Gd-EOB-DTPA存在两类非对映异构体Gd-A和Gd-B，它们在25～120℃和 pH值5～9范围内以较为恒定的比例存在(65％：35％)。

然而有研究报道肾功能衰竭的患者钆塞酸二钠的半期会延长至10倍左右，导致钆剂在体内沉积和引发肾源性系统性纤维化(NSF)的风险随之大增，这个现象提示钆塞酸二钠并不是理想中高效的肝、肾双通道排泄对比剂，纠其原因可能和钆塞酸二钠含A、B两类非对映异构体有关。因此，有必要对钆塞酸二钠的两类非对映异构体的成像效果进行研究。

发明内容

本发明的目的是提供钆塞酸二钠非对映异构体A(Gd-A)的分离纯化、长期存放条件以及其在作为MR成像对比剂的应用。

钆塞酸二钠的两类非对映异构体(Gd-A和Gd-B)在常温下异构化平衡比例为65％：35％，但是纯化后的Gd-A即开始向Gd-B转化，因此关键是如何将纯化后的 Gd-A长期保持纯度不转化为Gd-B。

本发明涉及的非对映异构体Gd-A和Gd-B均存在手性异构，其结构式分别如式Ⅰ(4S6R手性异构)和式Ⅱ(4S 6S手性异构)所示：

本发明首先提供了钆塞酸二钠非对映异构体A的分离方法，包括如下步骤：

S1、采用反相HPLC分离钆塞酸二钠，得到含有钆塞酸二钠非对映异构体A的洗脱液；

S2、对所述含有钆塞酸二钠非对映异构体A的洗脱液进行浓缩，得到含有钆塞酸二钠异构体A的浓缩液；

S3、所述含有钆塞酸二钠异构体非对映A的浓缩液经低温冻结后进行冷冻干燥，得到白色固体粉末状的钆塞酸二钠非对映异构体A，并储存于真空玻璃瓶中；

上述的分离方法中，所述含有钆塞酸二钠非对映异构体A的洗脱液和所述含有钆塞酸二钠非对映异构体A的浓缩液均储存于-20℃～0℃的低温冷冻环境中，如可存储于低温冰箱冷冻层中。

上述的分离方法中，所述含有钆塞酸二钠非对映异构体A的洗脱液和所述含有钆塞酸二钠非对映异构体A的浓缩液中钆塞酸二钠非对映异构体A的纯度均大于 99％，采用反相HPLC的方式检测纯度，可在如下条件下进行：流动相为纯甲醇或乙腈和0.01mol·L^-1磷酸盐缓冲液(5～25％：75～95％)，速率0.5～1ml/s，柱箱温度 35～45℃，检测波长226nm，进样量为10～15μl，Gd-A出峰时间约在20mins、Gd-B 出峰时间在21mins左右。

上述的分离方法中，步骤S1中，所述反相HPLC的检测条件如下：