[发明专利]一种低温起爆有机肥菌株诱变优化方法及菌剂复配工艺

说明书

一种低温起爆有机肥菌株诱变优化方法及菌剂复配工艺，包括菌株诱变优化方法如下：S1：菌株的筛选，S2：细菌培养基，S3：寡营养培养基，S4：12C6+离子束注入诱变，S5：突变菌株的筛选，S6：突变菌株生长性能测定，采用以上步骤后，本发明具有如下优点：采用重离子研究装置，对有机肥发酵菌株辐照处理，经过特点条件筛选出高效突变菌株；菌株经过辐照处理后，后续的生长速度提升，与原始菌株相比，均提前6h达到生长稳定期；添加突变菌株的微生物菌剂在低温环境下，可提前达到高温期，高温保持时间长，对后续的发酵过程有明显促进作用。

技术领域

本发明涉及菌株诱变技术领域，具体是指一种低温起爆有机肥菌株诱变优化方法及菌剂复配工艺。

背景技术

生物有机肥是指特定功能微生物与主要以动植物残体(如畜禽粪便、农作物秸秆等)为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。畜禽粪便、农作物秸秆、城镇生活垃圾以及园林植物废弃物是干扰世界环境和人们健康的直接来源。又由于长期不合理的使用化学肥料，造成部分农田营养成分比例失调，导致农田生态环境、土壤理化特性和区系土壤微生物受到不同程度的破坏，在一定程度上危及到农产品的安全和人们的生活质量。而生物有机肥不仅提供植物生长所需要养分，补充土壤区系微生物的同时，还能有效的改良土壤板结、防止土壤盐碱化、减少化肥用量等特点。因此，生物有机肥在实现世界环境与生态可持续发展方面发挥重要的作用。

菌种选育的目的是改良或改变菌种的特性，使其符合工业生产或科研的要求。菌种选育过程由三个环节组成:一是使菌种产生变异，二是筛选出变异的菌株，三是使变异菌株的特性得到表达。根据使菌种产生变异的方式的不同，菌种选育可分为自然选育、诱变育种、杂交育种、基因工程这四种方法。自然选育、诱变育种是利用基因突变来获得优良菌种，具有改良菌种特性的性质，但是现有的诱变育种步骤复杂，效果差，诱变后的突变菌株无法对后续的过程有明显促进作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是克服以上的技术缺陷，提供一种低温起爆有机肥菌株诱变优化方法及菌剂复配工艺。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种低温起爆有机肥菌株诱变优化方法及菌剂复配工艺，包括菌株诱变优化方法如下：

S1：菌株的筛选，所述的菌种包括特基拉芽孢杆菌GSICC30298、特基拉芽孢杆菌GSICC32846、蜡样芽孢杆菌GSICC30299、苏云金芽孢杆菌GSICC32845、贝莱斯芽孢杆菌GSICC32847；

S2：细菌培养基，细菌培养基包括胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、蒸馏水1000mL，pH至7.0，在120℃-130℃高压蒸汽灭菌20-30min；

S3：寡营养培养基，寡营养培养基为细菌培养基稀释5倍；

S4：12C6+离子束注入诱变，将S1筛选的菌株于S2的细菌培养基中振荡培养至对数期，吸取1.5ml菌液至一次性培养皿中，经过辐照设备进行辐照处理，12C6+离子束注入辐照后的菌液诱变，12C6+离子束注入LET为60KeV，辐照剂量分别为40Gy、80Gy、 120Gy、160Gy、200Gy、240Gy；

S5：突变菌株的筛选，取S4中不同辐照剂量12C6+离子束诱变处理后的菌液，分别梯度稀释至10-5、10-6、10-7三个梯度，分别吸取0.1mL的三个梯度的菌液，添加到S3中寡营养培养基平板上均匀涂布，5℃倒置培养5d，挑取培养基上长势较好的菌落，纯化后保存待用；

S6：突变菌株生长性能测定，分别取S5中的突变菌株的菌落种于细菌培养基中，37℃振荡培养48h，采用分光光度计法测定OD600值，在相同培养条件下为对照，生长速度最快的突变菌株为贝莱斯芽孢杆菌突变株和蜡样芽孢杆菌突变株。

采用以上步骤后，本发明具有如下优点：