[发明专利]基于大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶检测L-丝氨酸的方法

说明书

本发明公开了基于大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶检测L‑丝氨酸的方法，属于氨基酸检测技术领域。该方法包括：将含有L‑丝氨酸的待测样品与大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶体外反应生成红色物质，通过观察红色物质的颜色或者测定其含量，定性或定量检测待测样品中L‑丝氨酸含量。本发明公开的方法工艺操作简单易行、反应步骤少，并且既能直接肉眼定性检测，又能定量检测L‑丝氨酸的含量。

技术领域

本发明涉及氨基酸检测技术领域，涉及基于大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶检测L-丝氨酸的方法。

背景技术

L-丝氨酸属于人体非必需极性氨基酸，主要参与机体蛋白质的生物合成，也是嘌呤、嘧啶、磷脂等的重要前体，在免疫调节、肿瘤代谢等过程中是重要的角色，有望作为部分癌症的肿瘤标志物。在药用方面，L-丝氨酸广泛应用于氨基酸输液和营养添加剂，其衍生剂也有优良的药用价值和生物学活性，在化妆品产业方面，因L-丝氨酸有润湿性和保湿性而被大量添加于高级化妆品中。随着对L-丝氨酸研究和认识的深入，以及医药保健事业的不断发展，L-丝氨酸的需求量也在不断增加。因此提供一种快速简便测定混合氨基酸中L-丝氨酸的含量的检测方法，尤其能排除D-丝氨酸、环丝氨酸、丝氨酸类似物和丝氨酸衍生物干扰的检测技术，对L-丝氨酸的开发利用具有极其重要的意义。

目前，国内外用来检测氨基酸含量的方法主要分为仪器法、显色法、化学发光法和酶反应法等，仪器检测方法通常有HPLC、GC-MS、LC-MS、NMR和氨基酸自动分析仪等，显色法有变色酸-分光光度法、纸层析-分光光度法以及茚三酮显色法，化学发光法主要是毛细管电泳-电致化学发光法，酶法有丝氨酸氨基转移酶法和胱硫醚裂解酶法等。

其中，液相色谱法、气相色谱法以及色谱质谱联用等仪器法灵敏度好，准确度高，但需要昂贵的仪器设备、专门实验室、受专业培训的实验人员以及高昂的费用维护成本和较高的实验耗材。茚三酮显色法作为最基本和最传统的检测方法，其操作简便、反应快速，但是其对反应条件的要求较高，需要对反应温度、pH、时间进行精确控制，并且对不同种类的氨基酸具有不同的灵敏度，不适合分析对精确性要求较高的样品。荧光猝灭法可以避免大部分氨基酸的干扰，但是样品需要经过复杂的磷酰化预处理，并且检测结果误差较大。纸层析-分光光度法操作简便，但是其稳定性差，不适用大批量样品的分析检测。变色酸-分光光度法反应速度快，操作简单，准确度高，但抗干扰能力差。

酶反应法具有良好的专属性和精准性，但目前所用的酶法反应步骤多，影响测定因素多，检测信号往往不能直接观察或者不能直接测定。因此非常有必要发展一种反应简便且反应后可以直接肉眼观察的酶法测定L-丝氨酸。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶检测L-丝氨酸的方法，该方法工艺操作便利、反应步骤少，并且既能直接肉眼定性检测，又能定量检测L-丝氨酸的含量。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供了一种基于大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶检测L-丝氨酸的方法，包括：将含有L-丝氨酸的待测样品与大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶体外反应生成红色物质，通过观察红色物质的颜色或者测定其含量，定性或定量检测待测样品中L-丝氨酸含量。

优选的是，定性检测待测样品中L-丝氨酸含量方法为：通过肉眼观察反应后是否有稳定的红色物质的生成，以及红色物质颜色的深浅，定性判定待测样品中L-丝氨酸的有无以及含量的多少。

优选的是，定量检测待测样品中L-丝氨酸含量方法包括：

测定L-丝氨酸标准液的吸光度，构建标准曲线；

测定反应后的红色物质的吸光度，并代入所述标准曲线的方程中，定量得到待测样品中L-丝氨酸的含量。

优选的是，测定所述L-丝氨酸标准液的吸光度和所述红色物质的吸光度所用波长均为528nm。

优选的是，所述大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。