[发明专利]一种凋亡微囊泡及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种凋亡微囊泡的制备方法，其特征在于，包括：

1）体外培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系；

2）细胞汇合度达到90-100%时，加入星形孢菌素诱导细胞凋亡；

3）收集培养液上清液，然后通过梯度离心法分离即得到凋亡微囊泡;

步骤1）中所述小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系为RAW264.7；

体外培养的培养基为： 含有10%FBS和1%青-链霉素双抗的DMEM培养基;

所述星形孢菌素（STS）添加量为500nM。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述梯度离心法是通过包括下述步骤的方法实现的：

a)将所述培养液上清液于4℃，以800g离心10min，取上清液，获得第一离心上清液；

b）将所述第一离心上清液于4℃、以2000g离心10min，取上清液，获得第二离心上清液；

c）将所述第二离心上清液于4℃、以16000g离心30min，取沉淀物，即得粗制凋亡微囊泡。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括：

d）将所述粗制凋亡微囊泡以无菌PBS洗涤，然后于4℃、以16000g离心30min，获得凋亡微囊泡纯品。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法制备得到的凋亡微囊泡，所述凋亡微囊泡呈双面凹的圆盘状，粒径为150-600nm，所述凋亡微囊泡平均粒径240nm。

5.如权利要求4所述的凋亡微囊泡在制备用于促进间充质干细胞成脂向分化的制剂中的应用。

6.一种用于促进间充质干细胞成脂向分化的制剂，其特征在于，包含如权利要求4所述的凋亡微囊泡。

7.如权利要求6所述制剂，其特征在于，还包含间充质干细胞。

8.如权利要求6所述制剂，其特征在于，凋亡微囊泡的浓度为2μg/mL。