[发明专利]一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法

说明书

本发明公开了一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，所述一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法包括如下步骤：材料准备；载体消毒；制备硅烷化载体；纤连蛋白固化；低温储存。本发明通过设置多张钛金属板和基板作为载体，钛金属板之间互不碰触，避免附着的纤连蛋白碰撞失活，钛金属板设置有多个分布均匀的冲孔，可提高纤连蛋白的附着面积，提高纤连蛋白储存活性，后期取用可直接取出基板和多张钛金属板，同时取用数量可根据钛金属板而定，方便取用，钛金属板的不存在流失的情况，基本没有损耗，使用紫外光辐照技术在钛表面构建甲基丙烯酸酰化明胶涂层，得到涂层载体钛金属，涂层载体钛金属表面对蛋白质的吸附和释放能力大大增强。

技术领域

本发明涉及纤连蛋白，具体为一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，属于蛋白质活性研究技术领域。

背景技术

纤维连接蛋白是一类细胞外基质蛋白，在细胞与细胞、细胞与基膜间起到桥联作用，维持细胞的正常形态和功能，它可以与肝素、肌动蛋白、纤维蛋白、胶原蛋白、DNA和细胞结合。其重要作用是促进细胞的黏连和粘附，可提高细胞的贴壁率、汇合率，缩短细胞汇合时间，使细胞形态结构良好，代谢率增强及蛋白质合成速度显著提高。

对于经常需要使用的纤连蛋白，一般将纤连蛋白放在-20度保存，为了避免纤连蛋白反复冻融，一般的做法是在纤连蛋白中加入一定量的甘油，但仅仅加入甘油，可以避免纤连蛋白反复冻融，但不能有效的防止纤连蛋白的降解。且由于保护剂的成分比较多，加入的量不同对纤连蛋白的影响也不一样，所以需要一种方法来保护纤连蛋白稳定性和生物学活性，常用的蛋白保护剂有甘油、甘露醇、聚乙二醇、甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、牛血清白蛋白等。

现有专利(公告号：CN111848807A)公开了一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，涉及蛋白质活性研究技术领域。将纤连蛋白固定于活化后的纯钛粉表面；将固定有纤连蛋白的固体粉末加入储存液中充分混匀后-20℃保存，所述储存液中包含蛋白酶抑制剂和蛋白保护剂；使用前离心去除储存液，PBS或TBS清洗沉淀后重悬至工作浓度即得纤连蛋白工作液。发明人在实现该方案的过程中发现现有技术中存在如下问题没有得到良好的解决：该方法中采用纯钛粉作为载体，纯钛粉在消毒时容易流失，消耗较大；该方法中的纯钛粉作为载体后期取用时需要使用离心设备，钛粉之间相互碰撞容易损坏导致纤连蛋白失活；该方法中采用使用无水乙醇清洗后在120℃下固化反应6h以增强APTE与活化钛粉表面的结合，得到硅烷化钛粉，硅烷化钛粉表面对蛋白质的吸附和释放能力有限。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的，一种保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法，所述保护纤连蛋白稳定性和生物学活性的方法包括如下步骤：

(1)材料准备，准备活性纤连蛋白溶液、多张钛金属板和基板，使用工具对钛金属板表面冲孔，基板一侧表面设置有多个插槽，将多张冲孔钛金属板分别插入到插槽中，得到载体钛金属组合。

(2)载体消毒，使用专用消毒液对载体钛金属组合进行超声波清洗，然后使用热风机充分干燥后备用。

(3)制备硅烷化载体，将活化载体钛金属组合加入到碱液中充分反应，再将3-氨丙基-三乙氧基硅烷(APTES)对钛表面进行硅烷化改性，使用紫外光辐照技术在钛表面构建甲基丙烯酸酰化明胶涂层，得到涂层载体钛金属。

(4)纤连蛋白固化，将涂层载体钛金属加入到活性纤连蛋白溶液中反应30min～60min，倒去多余液体，然后使用缓冲液冲洗未结合的纤连蛋白，得到固化纤连蛋白载体钛金属。

(5)低温储存，向固化纤连蛋白载体钛金属中加入储存液，然后密封放入-20℃的低温箱中储存。

优选的，步骤(1)中钛金属板为纯钛金属板，其厚度为100μm～1000μm，冲孔孔径为48μm～200μm。