[发明专利]一种基于谱效关系的三七质量检测方法

权利要求书

1.一种基于谱效关系的三七质量检测方法，其特征在于：包括有以下步骤：1)三七HPLC指纹图谱的建立；2)三七活血作用的药效研究；3)三七指纹图谱与药效指标的谱效关系的建立；4)基于三七的谱效关系建立三七质量评价的检测方法；

所述步骤1)三七HPLC指纹图谱的建立，包括以下步骤：

混合对照品溶液的制备：分别精密称取对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷RH1和人参皂苷Rg2各10mg，分别加甲醇溶液定容于10mL容量瓶中，即得标准品溶液；

供试品溶液的制备：精密称取三七粉15.0g，加入7.7倍量66％乙醇回流提取1.5小时，提取两次，合并滤液；将滤液定容至200mL容量瓶中，13000r/min离心10min，过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液

色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH Shield C18，色谱柱规格：2.1×100mm，1.7μm；流动相：以0.1％磷酸水为流动相A，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱；检测波长：203nm；流速0.3mL/min；柱温40℃；进样量3μL；梯度洗脱程序为：

所述步骤2)三七活血作用的药效研究，包括三七对急性心肌缺血和急性血瘀的影响；

所述步骤3)三七指纹图谱与药效指标谱效关系的建立，包括灰色关联分析方法和PLSR分析三七活血的谱效关系；其灰色关联分析方法为：把三七各个药效指标作为参考数列，指纹图谱中的特征峰的峰面积作用比较数列，计算灰色关联系数及关联度，再采用层次分析法计算各药效指标的初始权重系数，再结合三七共有峰的总药效进行灰色关联分析，得到关联度顺序为：峰4峰2峰5峰7峰11峰8峰3峰14峰13峰12峰10峰1峰9峰6；其PLSR分析三七活血的谱效关系的方法为：以指纹图谱中各共有峰的峰面积为X，以层次分析得到的三七活血的总药效数据为Y，采用软件SIMCA 14.1进行偏最小二乘回归法相关性分析，计算出各X对应Y的回归系数，其中回归系数代表各X对Y的贡献大小，以此回归系数建模，得回归方程为：Y＝0.0316X₁+0.0242X₂+0.0430X₃+0.0059X₄+0.1492X₅+0.1040X₆+0.0885X₇+0.0369X₈+0.1261X₉-0.0219X₁₀+0.0554X₁₁+0.0236X₁₂+0.0443X₁₃+0.1062X₁₄；

所述步骤4)基于三七的谱效关系建立三七质量评价的检测方法为：结合三七活血总药效的灰色关联度分析及偏最小二乘法分析结果，选择灰色关联度分析结果中关联度大于0.7及偏最小二乘法分析中对三七活血药效呈正相关且VIP值大于1的特征峰，通过计算选择特征峰占总峰面积的比例来制定三七质量评价的检测方法；其三七质量评价的检测方法为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH Shield C18，色谱柱规格：2.1×100mm，1.7μm；流动相：以0.1％磷酸水为流动相A，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱程序为：

其特征峰占比不得低于23.17％；其特征峰峰1、峰3、峰5、峰7、峰8、峰9、峰11、峰12相对保留时间依次为0.608、0.925、1.018、1.227、1.239、1.271、1.324、1.742。

2.根据权利要求1所述的基于谱效关系的三七质量检测方法，其特征在于：步骤2)所述三七活血作用，包括血清心肌酶指标、心肌组织心肌酶指标、心肌形态学变化及凝血功能药效指标。