[发明专利]一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法

权利要求书

1.一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法，其特征在于，包括以下步骤：

外植体选择步骤：采挖多花黄精根茎，切取完整的隐芽，连同少许隐芽连接处的根茎组织，同时继续剥离隐芽外层鳞片，保留2-3cm的有效芽头，并切去多余的组织，从而保留完整的幼嫩芽体，将获取的幼嫩芽体在洗衣粉液中冲洗30min，洗净获得外植体嫩芽；

外植体消毒步骤：在无菌环境下，将外植体嫩芽用75％酒精消毒30s，然后用0.1％升汞液浸泡外植体嫩芽10-15min，同时在无菌水冲洗5-6次，获得无菌外植体嫩芽，灭菌完成的外植体放在玻璃瓶中备用；

愈伤诱导培养步骤：将消毒后的外植体嫩芽接种到愈伤组织诱导培养基上，在光照强度800-1000Lux下培养45-60d，以获得膨大的愈伤组织；

诱导成苗步骤：包括两步成苗法和一步成苗法；

移栽定植步骤：包括生根株苗移栽和微块茎移栽。

2.根据权利要求1所述的一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法，其特征在于，所述诱导成苗步骤中的两步成苗法包括：

第一步，不定芽增殖诱导培养，将膨大的愈伤组织接入不定芽诱导培养基中，诱导培养基为MS+2.0-4.0mg/L 6-BA+0.2-0.5mg/L 2,4-D+0.1-0.2mg/LTDZ+60g/L蔗糖，常规光照培养15-25d，愈伤团块表面出现凸起的芽点，获得芽微块茎；

第二步，生根成苗，将带有芽点的芽微块茎切成带单个芽点的小块茎，接入到生根培养基1/2MS+1.0-2.0mg/L IBA中，常规光照培养15-20d，生长成根系发达且具有3-5片完全展叶的健康株苗。

3.根据权利要求1所述的一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法，其特征在于，所述诱导成苗步骤中的一步成苗法包括：微块茎的诱导，将愈伤诱导培养步骤中的膨大愈伤组织接入MS+1.5-2.5mg/L 6-BA+0.2-0.4mg/L2,4-D+0.1-0.2mg/LTDZ+60g/L蔗糖液体培养基中，温度控制在27-28℃，恒温摇床无菌条件培养，7d左右更换新的培养基，21-28d，收获带3-5个芽点的黄精微块茎。

4.根据权利要求1所述的一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法，其特征在于，所述移栽定植步骤中的生根株苗移栽包括，对生根后的多花黄精植株苗进行培育处理，将组培瓶拧松，每天喷水1-2次进行保湿，连续练苗3-4d，以此应激处理提高株苗移栽成活率，直接移栽定植于苗床，进行常规管理，并注意保湿，生长成苗。

5.根据权利要求1所述的一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法，其特征在于，所述移栽定植步骤中的微块茎移栽是将摇床组培瓶中的微块茎收集清洗干净，直接播种在苗床，注意覆土，进行常规管理。

6.根据权利要求1所述的一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法，其特征在于，所述外植体选择步骤中的多花黄精根茎采取每年十一月份的根茎进行组培，切取隐芽的长度保持在2-3cm。

7.根据权利要求1所述的一种以根状茎嫩芽为材料的多花黄精组培方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养步骤中使用的愈伤组织诱导培养基为MS+3.0-6.0mg/L 6-BA+0.2-0.4mg/LNAA琼脂固体培养基，pH 5.8-6.0。