[发明专利]一种可用于新冠病毒中和抗体活性评价和作为核酸检测标准物的假病毒颗粒及其制备方法

说明书

本发明提供了一种可用于新冠病毒中和抗体活性评价和作为核酸检测标准物的假病毒颗粒及其制备方法。解决目前新冠抗病毒研究中进行中和抗体效应评价采用新冠活病毒所存在的生物安全隐患问题，以及新冠核酸检测用假病毒核酸标准物制备中可能存在的病毒复制等安全隐患问题的不足之处。该假病毒颗粒以慢病毒为框架；其外膜蛋白是VSV‑G蛋白与新冠病毒S蛋白受体结合基序融合的外膜蛋白；其核心基因为SARS‑CoV‑2病毒基因片段；所述SARS‑CoV‑2病毒基因片段为该病毒7个RNA片段的串联体；所述7个RNA片段分别为该病毒基因的13340‑13462位碱基、15430‑15530位碱基、22721‑22861位碱基、26269‑26382位碱基、28706‑28834位碱基、28880‑28981位碱基、29741‑29890位碱基。

技术领域

本发明属于标准化技术领域、病毒治疗研究领域和基因检测诊断技术领 域，具体涉及一种新冠病毒(SARS-CoV-2)抗体的中和活性评价、抗病毒 药物活性评价以及核酸检测中定性与定量标准品的假病毒颗粒构建与制备。

背景技术

新冠病毒是一种具有包膜的正链单股RNA病毒，颗粒呈圆形或椭圆 形，直径约80～120nm，属于网巢病毒目冠状病毒科，包含29903个碱基， 编码约9860个氨基酸(其中S-RBD片段长669bp)；其包含两个侧翼非翻译 区(UTRs)、一个5'端长的开放阅读框(ORF1a/b)以及几个编码结构蛋白的开放 阅读框。ORF1a/b编码病毒复制相关的非结构蛋白(NSPs)，占整个基因组开 放阅读框的三分之二，其编码产生的复制酶复合体能够被木瓜样蛋白酶(PLpro)和3C样蛋白酶(3CLpro)水解，产生16个非结构蛋白。3'端的开放阅 读框包含9个头端保守的小向导RNA(sgRNA)、9个转录调控序列 (TRS)、2个末端UTR，主要编码病毒结构蛋白：刺突蛋白(spike protein， S)、包膜蛋白(envelope protein,E)、膜蛋白(membraneprotein,M)和核衣壳蛋 白(nucleocapsid protein,N)，占整个基因组开放阅读框的三分之一。其中S蛋 白介导病毒识别宿主细胞受体，促进膜融合，并诱导免疫反应产生中和抗体。

S蛋白包含S1、S2两个亚基，病毒感染细胞时，两个亚基之间的多碱 基剪切位点被组织蛋白酶L和跨膜丝氨酸蛋白酶2通过酶切作用剪切后，位 于S1亚基上受体结合域(RBD)的受体结合基序(RBM)与细胞膜上的血 管紧张素转化酶(AngiotensinⅠ-convertingenzyme 2，ACE2)受体结合，介导 病毒识别宿主细胞。研究表明，与SARS相比，SARS-CoV-2的RBM与 ACE2的亲和力约高出10～20倍，结合能力也显著增强。因此，S区基因的 变异也是目前最受关注的，尤其是S区的RBM区域更是备受关注。

在抗病毒治疗和疫苗评价中，RBM是抗病毒免疫的最主要靶点。阻断 病毒与宿主细胞结合的抗病毒研究中，通常需要采用活病毒进行体外细胞实 验。由于新冠病毒属于烈性传染病，涉及病原的相关研究受到严格的管控， 以至于该研究受到了极大的限制。因此，在抗病毒研究，尤其是以阻断病毒 吸附宿主细胞的抗病毒研究急需一种既能识别并结合宿主细胞上ACE2受 体，又不具感染性的安全替代品--假病毒颗粒。