[发明专利]DNA纳米球检测探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种DNA纳米球检测探针，其特征在于，包括单链探针A、单链探针B和单链探针C，所述单链探针A、单链探针B和单链探针C均至少含有一段回文序列的粘性末端，所述单链探针C还具有用于端粒酶反应的引物序列，在端粒酶作用下，单链探针C的末端会延伸出端粒重复序列（TTAGGG）n，得到端粒酶产物链D-STP；其中，n为大于等于1的整数；所述单链探针A、单链探针B和DNA端粒酶产物链D-STP的端粒重复序列部分互补，以形成Y型结构DNA，所述Y型结构DNA以粘性端连接，依次放大排列得到所述DNA纳米球检测探针，所述DNA纳米球检测探针的直径为10~100nm。

2.根据权利要求1所述DNA纳米球检测探针，其特征在于，所述单链探针A如序列表中的SEQ ID No.1、2或3所示，所述单链探针B如序列表中的SEQ ID No.4、5或6所示，所述单链探针C的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.7、8或9所示。

3.根据权利要求2所述DNA纳米球检测探针，其特征在于，所述单链探针A如序列表中的SEQ ID No.1所示，所述单链探针B如序列表中的SEQ ID No.4所示，所述单链探针C的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.7所示。

4.根据权利要求1所述DNA纳米球检测探针，其特征在于，所述DNA纳米球检测探针的直径为80~95 nm。

5.根据权利要求1~4任一项所述DNA纳米球检测探针在检测端粒酶活性中的应用。

6.根据权利要求1~4任一项所述DNA纳米球检测探针在比色传感器中的应用。

7.根据权利要求1~4任一项所述DNA纳米球检测探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S11.将DNA端粒酶产物链D-STP与单链探针A混合，并在室温下反应20~30分钟，得到混合液，所述单链探针A的浓度为25~125 nM；

S12.将单链探针B加入到步骤S11中的混合液中室温下反应120~180分钟；所述单链探针B的浓度为25~125 nM，得DNA纳米球检测探针。

8.根据权利要求7所述DNA纳米球检测探针的制备方法，其特征在于，所述DNA端粒酶产物链D-STP是通过单链探针C在活性端粒酶的作用下，进行延伸反应得到。

9.一种利用权利要求1~4任意一项所述DNA纳米球检测探针检测端粒酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S21.取权利要求7所制备的DNA纳米球检测探针，加入0.31~0.48 μM的SYBR Green Ⅰ反应15~20分钟；

S22.将4~10nM的金纳米粒子加入到步骤S21中，观察颜色。

10.根据权利要求9所述利用所述DNA纳米球检测探针检测端粒酶活性的方法，其特征在于，所述金纳米粒子的平均粒径为11.7~14.2nm。