[发明专利]DNA纳米球检测探针及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种DNA纳米球检测探针及其制备方法和应用。所述DNA纳米球检测探针包括单链探针A、单链探针B和单链探针C，所述单链探针A、单链探针B和单链探针C均至少含有一段回文序列的粘性末端，所述每段回文序列为10个碱基，所述单链探针C还具有用于端粒酶反应的引物序列，所述单链探针A、单链探针B和DNA端粒酶产物链D‑STP的端粒重复序列部分互补，以形成Y型结构DNA，所述Y型结构DNA以粘性端连接，依次放大排列得到所述DNA纳米球检测探针，所述DNA纳米球检测探针的直径为10~100nm。所述DNA纳米球检测探针可以准确地检测端粒酶在不同细胞系中的活性，具有灵敏度、检测限低、快速识别等优点。

技术领域

本发明涉及生物传感技术领域，更具体地，涉及一种DNA纳米球检测探针及其制备方法和应用。

背景技术

端粒是一段具有重复序列(TTAGGG)的DNA序列，通常存在于细胞染色体的末端。在细胞分裂过程中，染色体的复制会导致端粒的不断缩短。而端粒酶作为体内广泛存在的一种逆转录酶，在维持端粒长度以及细胞生长、分化过程中起到非常关键的作用。端粒酶通过在端粒的3'端不断的复制TTAGGG的重复序列达到维持端粒长度以及细胞活性的目的。2009年，ELIZABETN等发现了端粒酶以及端粒对于细胞活性的保护机制而获得了诺贝尔医学奖。此后，许多研究表明端粒酶的活性过高可能会诱导细胞的永久性存活，甚至引发癌症。但是，端粒酶活性过低又会加速细胞衰老，甚至凋亡。在正常人的体细胞中，端粒酶处于抑制的状态，研究发现在包括胃癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌等大多数癌症细胞中，端粒酶的活性明显高于正常水平。因此，端粒酶活性检测在癌症的诊疗等方面具有重大的研究意义。越来越多的研究者发现端粒酶可以作为重要的靶点在癌症的诊断，治疗方面发挥作用。因此，如何准确、灵敏、快速地获得端粒酶活性成为了在临床诊断和治疗方面的一大热点。

传统的端粒酶检测方法包括端粒重复序列扩增法、端粒重复序列延伸法、荧光素标记的端粒酶重复序列扩增法等，这些方法存在样本需要量大、检测时间长、操作复杂、假阳性、价格昂贵，不能可视判断等缺点。

发明内容

本发明为克服上述现有检测方法效果不好的缺陷，提供一种DNA纳米球检测探针。

本发明的另一目的在于提供所述DNA纳米球检测探针的制备方法。

本发明的另一目的在于提供所述利用DNA纳米球检测探针检测端粒酶活性的方法。

本发明的另一目的在于提供所述DNA纳米球检测探针的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种DNA纳米球检测探针，其特征在于，包括单链探针A、单链探针B和单链探针C，所述单链探针A、单链探针B和端粒酶引物序列均至少含有一段回文序列的粘性末端，所述单链探针C还具有用于端粒酶反应的引物序列，在端粒酶作用下，单链探针C的末端会延伸出端粒重复序列(TTAGGG)n，得到端粒酶产物链D-STP；其中，n为大于等于1的整数；所述单链探针A、单链探针 B和DNA端粒酶产物链D-STP的端粒重复序列部分互补，以形成Y型结构DNA，所述Y型结构DNA以粘性端连接，依次放大排列得到所述DNA纳米球检测探针，所述DNA纳米球检测探针的直径为10～100nm。

所述回文序列是指核苷酸片段在其中一条链上按5'到3'读取的序列与其互补链上按相同的5'到3'读取的序列一致。

本发明提供了一种DNA纳米球检测探针，所述DNA纳米球检测探针稳定且具有单分散结构，直径在10～100nm。

优选地，所述单链探针A如序列表中的SEQ ID No.1、2或3所示，所述单链探针B如序列表中的SEQ ID No.4、5或6所示，所述单链探针C的核苷酸序列如序列表中的SEQ IDNo.7、8或9所示。