[发明专利]一种壳聚糖-羧甲基纤维素固定化酶及其制备方法

权利要求书

1.一种壳聚糖-羧甲基纤维素固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：①将壳聚糖粉末溶于醋酸溶液制成浓度为1～4mg/ml壳聚糖醋酸溶液，②将羧甲基纤维素中经乙醇润湿后，加入纯化水溶解制成浓度为1～2mg/ml的羧甲基纤维素溶液，③将羧甲基纤维素溶液壳聚和糖醋酸溶液混合均匀，形成混合溶液，④将木瓜蛋白酶溶解于pH为5.5的磷酸缓冲溶液制成浓度为3.5mg/ml的木瓜蛋白酶溶液，⑤液体石蜡和石油醚按重量比1:3混合，在液体石蜡和石油醚的混合液中加入乳化剂形成油相预混液，乳化剂在油相预混液中的质量百分比为2-3%，⑥在搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液和羧甲基纤维素溶液的混合溶液通过多孔膜压入油相预混液中，重复步骤⑥1h，⑦冰浴0-5℃并继续搅拌，得到固化的壳聚糖-羧甲基纤维素微球，将固化的壳聚糖-羧甲基纤维素微球用石油醚离心洗涤3次，用无水乙醇抽洗4-5次，真空冻干得到壳聚糖-羧甲基纤维素微球，其中，羧甲基纤维素在壳聚糖-羧甲基纤维素微球中的质量百分比为11-20%，⑧将冻干的壳聚糖-羧甲基纤维素微球加入浓度为3.5mg/ml的木瓜蛋白酶溶液中，震荡吸附4h，⑨加入质量百分浓度为1-2.5%的戊二醛溶液交联1h，再用浓度为1.5mg/ml的甘氨酸溶液洗去多余的戊二醛溶液，干燥后得到壳聚糖-羧甲基纤维素微球固定化木瓜蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的壳聚糖-羧甲基纤维素固定化酶的制备方法，其特征在于：所述乳化剂为司盘60、司盘40或司盘20。

3.根据权利要求1所述的壳聚糖-羧甲基纤维素固定化酶的制备方法，其特征在于：所述步骤⑧中，壳聚糖-羧甲基纤维素微球与木瓜蛋白酶的重量比为1000：1.16-1000:2.05。

4.根据权利要求1所述的壳聚糖-羧甲基纤维素固定化酶的制备方法，其特征在于：壳聚糖醋酸溶液和羧甲基纤维素溶液的混合溶液和油相预混液的体积比为1:2000-3000。

5.一种壳聚糖-羧甲基纤维素固定化酶，其特征在于：采用如权利要求1-4任意一项所述的壳聚糖-羧甲基纤维素固定化酶的制备方法制得。