[发明专利]一种检测牙髓状态的次氯酸荧光探针

说明书

本发明提供了一种检测牙髓状态的次氯酸荧光探针，具有式I所示结构。本发明的荧光探针对次氯酸有非常好的比率响应性，检测灵敏度高，可快速准确判断牙髓状态，为口腔临床操作中正确保存牙髓提供依据，具有极高的应用价值。

技术领域

本发明属于荧光探针技术领域，具体涉及一种检测牙髓状态的次氯酸荧光探针。

背景技术

在口腔临床中，龋病、牙外伤、牙周病等诸多因素均可引起牙髓状态改变，导致牙髓炎症、损伤、坏死。正常牙髓组织具有重要的生理功能，如营养牙齿、为牙齿提供感觉、形成反应性牙本质，同时存在免疫细胞以抵抗外部刺激进入机体。而牙髓状态改变会或多或少影响牙髓的功能。

牙髓状态的判断直接决定了口腔临床医生的治疗手段及患牙的远期预后。错误地判断牙髓状态可导致牙髓炎症未及时治疗而向根尖组织蔓延，或牙髓过度治疗而错失牙髓修复再生的机会。例如牙外伤在口腔临床中极其常见，在学生中牙外伤的发病率高达25％，多数集中在6-9岁儿童。而在这一阶段，牙根尚未发育完全，因此，临床常会根据牙髓状态，最大限度的保存活髓，以求牙根继续发育。而外伤牙之后，临床常规判断牙髓活力的电测仪由于牙髓休克等原因，难以获得准确结果。临床医生往往只能根据牙髓暴露的时间，穿髓孔的大小来大致预测感染的范围，这就造成了牙髓状态判断不准确，导致治疗中未完全去除感染炎症牙髓，最终发展为根尖周炎等，或过度去除了健康牙髓。因此，精准地判断牙髓状态，最大限度地保留牙髓，促进牙根发育，是目前口腔临床中亟待解决的问题。

牙髓状态判断的金标准是病理切片检测，而病理切片组织获取困难，得到结果耗时长，而临床操作要求快速的诊断，以确定治疗方案，并尽早干预治疗，以求疾病不会进一步发展。这就使得病理切片诊断这一金标准难以在临床得以应用。因此，目前临床主要采用综合评估的方式是结合患者的主管症状，以及冷热诊、电活力测试及多普勒血流测试等结果综合快速判断，单一技术存在一定的局限性和技术敏感性，而综合判断也依赖医生的主观经验。因此，目前病理学检测标准与临床实际采用的检测标准之间存在的矛盾尚无有效的解决方案。寻求新的判断牙髓损伤预后的方法，将对牙髓疾病早期诊断、全面提高口腔诊疗能力有重要的推动作用。

牙髓状态改变伴随着牙髓内细胞代谢水平变化。如炎症过程中，炎症细胞如激活的巨噬细胞和中性粒细胞可以释放活性氧ROS如次氯酸HClO。因此，可能通过对次氯酸的检测实现对牙髓验证状态的判断。

目前常用的检测次氯酸的方法包括：比色法、电位分析法、化学发光法、库伦滴定法、荧光分析法等。其中，基于荧光探针的荧光分析法因灵敏度高、选择性高、易于操作、能够实现实时、无损的检测等特点，获得了很高的关注。通过高活性氧HClO的荧光探针，可视化地检测HClO的产生，将可以有效提示牙髓的炎症状态。

罗丹明(Rhodamine)类化合物具有摩尔消光系数高、荧光量子产率高，光稳定性好、激发波长和发射波长较长等优异的光物理性能和光化学性能，是制备荧光探针的理想材料之一。

例如：Koide等人采用定位于线粒体的罗丹明为荧光团，设计了如式A所示的荧光淬灭的探针，在被次氯酸的高活性氧(hROS)氧化后，对氧基苯胺部分脱除得到式B所示化合物，释放出的荧光，从而起到检测作用(Koide Y，Urano Y，Kenmoku S，Kojima H，NaganoT.J.Am.Chem.Soc.，2007，129:10324.)。

Kenmoku等人基于罗丹明“开-闭”环体系设计合成式C所示增强型的次氯酸荧光探针，未加入次氯酸之前，硫醇具有强亲核性使得罗丹明以螺环形式存在，为荧光淬灭的探针，次氯酸作用将硫醚氧化为磺酸盐后，失去亲核性，生成开环的罗丹明产物式D，释放荧光，从而起到检测作用。