[发明专利]一种头孢菌渣中头孢菌素C的液质联用检测方法

说明书

本发明公开了一种头孢菌渣中头孢菌素C的检测方法，它包括如下步骤：a、标准品溶液制备；b、供试品溶液制备；c、分别吸取标准曲线工作溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱仪；色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：体积比10:90的甲醇和0.1％甲酸；质谱条件为：电离方式：电喷雾正离子；扫描模式：多反应监测(MRM)。本发明操作简单、快速，成本低廉；准确度及灵敏度高、专属性强、重现性好，能快速有效检测头孢菌渣中头孢菌素C的残留量。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种头孢菌渣中头孢菌素C的液质联用检测方法。

背景技术

头孢菌素C主要是作为制备7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)的中间体，是由青霉菌近缘的头孢菌属真菌产生的抗生素之一。真菌发酵生产后剩余的培养基残余物，以下简称“菌渣”，含有丰富的营养物质，其中蛋白质和多糖含量较高，故将其转化为肥料、饲料是许多制药厂经济有效的选择，但是同时菌渣中含有大量菌丝体，如果处置不当，会引起二次发酵，产生异味，污染水体，可能还有产生耐药性基因的潜在风险。在2008年修订的《国家危险废物名录》中，抗生素菌渣被列为一种危险废弃物，因此，抗生素菌渣的无害化处理及资源化利用将成为整个行业亟待解决的重难点问题。

目前，国内外尚无头孢菌渣中头孢菌素C残留的标准检测方法，且现有资料报道的前处理步骤十分繁杂，需要反复有机试剂提取，或用固相萃取装置净化，提高样品前处理成本，且通常采用高效液相色谱仪，配置紫外检测器进行检测，但是头孢菌素C的摩尔吸光系数没有足够高，使得检测方法无法满足快速检测菌渣中较低含量头孢菌素C的要求。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种头孢菌渣中头孢菌素C的检测方法，它包括如下步骤：

a、标准品溶液制备：头孢菌素C标准品，加水配制成标准品溶液，；

b、供试品溶液制备：取待测样品，加水混匀，涡旋，离心，取上清液过滤，即得供试品溶液；

c、分别吸取标准品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪；

色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：体积比10:90的甲醇和0.1％甲酸；

质谱条件为：电离方式：电喷雾正离子；扫描模式：多反应监测(MRM)。

进一步地，步骤b所述待测样品与水的质量体积比为0.5～1.5g:10ml，优选1g:10ml；和/或步骤a)和步骤b)所述水为去离子水。

进一步地，步骤a所述标准品溶液制备的过程在冰盒中进行，制得的标准品溶液及时检测或放置于4℃冰箱中待测；步骤b所述供试品溶液制备的过程在冰盒中进行，制得的供试品溶液及时检测或放置于4℃冰箱中待测。

进一步地，步骤b)所述混匀后再涡旋振荡3～10min，优选5min；所述离心速度2000～5000rpm/min，时间5～20min，优选速度4000rpm/min，时间10min；所述过滤是用0.22μm无机微孔滤膜过滤。

进一步地，步骤c)所述色谱条件的色谱柱为Waters-C18柱，规格2.1×50mm，1.7μm；进样量为1-25μL，优选10μL；柱温为20-45℃，优选35℃；流速为0.1-0.3mL·min^-1，优选0.25mL·min^-1。

进一步地，步骤c)所述质谱条件的离子源温度为150℃；去溶剂气温度为450℃；去溶剂气流量为650L/h；喷雾电压为3.2kv；锥孔电压为24V；碰撞电压18V；扫描母离子m/z为416.09，定量子离子m/z为142.99，定性子离子m/z为184.99。

本发明还提供了一种头孢菌渣中头孢菌素C的含量测定方法，它包括如下步骤：