[发明专利]一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：

试剂盒包括试纸条和壳体，所述试纸条由PVC底板(1)、玻璃纤维膜(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)组成；所述PVC底板(1)上从左往右依次粘贴有玻璃纤维膜(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)；所述结合垫(3)内含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体免疫复合物，硝酸纤维素膜(4)上自左向右包被有检测线和质控C线(44)。

2.根据权利要求1所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述检测线包括T1线(41)、T2线(42)、T3线(43)；所述T1线(41)、T2线(42)、T3线(43)和质控C线(44)自左向右依次排列；T1线(41)包被环瓜氨酸肽重组蛋白；T2线(42)包被正五聚体蛋白3重组蛋白；T3线(43)包被双特异性磷酸酶11重组蛋白；质控C线(44)含有羊抗鼠IgG抗体。

3.一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：在PVC底板(1)的中间位置贴上硝酸纤维素膜(4)，硝酸纤维素膜上包被有T1线(41)、T2线(42)、T3线(43)和质控C线(44)；T1线(41)靠近玻璃纤维膜(2)一端，质控C线(44)靠近吸水纸(5)一端；在PVC底板(1)的左侧贴上玻璃纤维膜(2)，并在硝酸纤维素膜(4)的交接处铺上结合垫(3)；结合垫(3)上含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体免疫复合物，结合垫(3)与硝酸纤维素膜(4)有1～2mm的重叠；在PVC底板(1)的右侧贴上吸水纸(5)，吸水纸(5)与硝酸纤维素膜(4)有1～2mm的重叠；切条，得到试纸条；将试纸条装入塑料卡形成试剂盒。

4.根据权利要求3所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：所述结合垫(3)的制备方法为：

(a)：在时间分辨荧光微球溶液中加入鼠抗人IgG抗体，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡16～18h；加入封闭剂，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡2～3h；在15000～16000rpm下，高速离心15～20min，去除上清，沉淀，用荧光工作液重旋，超声均匀，荧光工作液加入量为原始时间分辨荧光微球溶液体积的1/2；

(b)：用喷金划膜仪，按照出液量为8-10μL/cm，速度80-100mm/s的喷涂参数，将时间分辨荧光微球溶液喷涂在结合垫(3)上，45～50℃烘箱烘干8～9h，保存备用。

5.根据权利要求4所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，所述鼠抗人IgG抗体稀释至1～2mg/mL，抗体加入量为每毫升时间分辨荧光微球溶液加入80-100μg。

6.根据权利要求4所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，所述封闭剂是终浓度为0.5～0.7％的20～25％BSA溶液。

7.根据权利要求4所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，所述荧光工作液的成分为：硼酸盐缓冲液+2％葡萄糖+0.5％PEG2000+0.01％TWEEN20+0.25％BSA。

8.根据权利要求4所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(a)中，所述时间分辨荧光微球溶液的制备方法为：

(a)：将时间分辨荧光微球用MES缓冲溶液稀释至0.1～0.2％(W/W)，作为时间分辨荧光微球溶液；

(b)：将EDC用MES缓冲溶液溶解至10～15mg/ml，加入到时间分辨荧光微球溶液中，涡旋混匀，加入EDC溶液，置于37～45℃摇床中震荡15～20min；

(c)：15000～16000rpm，15～20min高速离心，去除上清，沉淀用MES缓冲溶液重旋，超声分散2～5min，制得时间分辨荧光微球溶液。