[发明专利]一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，所述荧光免疫层析试剂盒由PVC底板、玻璃纤维膜、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成；结合垫内含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体；硝酸纤维素膜上包含3条检测线：T1线包被环瓜氨酸肽重组蛋白；T2线包被正五聚体蛋白3重组蛋白；T3线包被双特异性磷酸酶11重组蛋白和1条质控C线：C线含有羊抗鼠IgG抗体。该试剂盒能够快速定性检测抗环瓜氨酸肽抗体或抗正五聚体蛋白3抗体或抗双特异性磷酸酶11抗体。该试剂盒对早期诊断类风湿关节炎，具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性好的优点。

技术领域

本发明涉及医用试剂盒技术领域，具体为一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法。

背景技术

类风湿关节炎(RA)是一种常见的以关节滑膜增生及软骨破坏引起的慢性炎症为主要特征的自身免疫性疾病。大多数情况下RA患者的这种慢性炎症反应会引起关节滑膜增厚最终导致关节的破坏。RA患者在2年以内大约70％的关节破坏症状进行性加重，该病如不及时诊断治疗，即可出现软骨和骨的侵蚀性病变，造成关节结构破坏，最终发展成为关节畸形、强直，导致不同程度的残疾，因此早期诊断至关重要。

目前，临床实验室诊断RA最常用的是检查血浆中的类风湿因子和抗环瓜氨酸肽抗体。由于类风湿因子受某些抗原、抗体物质的干扰，常出现假阳性，特异性不高，常常只能根据临床症状和x线表现诊断，从而导致误诊和漏诊。

其次，抗环瓜氨酸肽抗体是以合成的环化瓜氨酸多肽为抗原的自身抗体，对RA的诊断有高度的特异性，但是敏感性较低，仍有三分之一的RA患者血浆抗环瓜氨酸肽抗体为阴性。

为解决上述问题，早期诊断类风湿关节炎，快速定性检测抗环瓜氨酸肽抗体，发明一种三合一的时间分辨荧光免疫层析试剂盒具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒，试剂盒包括试纸条和壳体，所述试纸条由PVC底板、玻璃纤维膜、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成；所述PVC底板上从左往右依次粘贴有玻璃纤维膜、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫内含有鼠抗人IgG抗体，硝酸纤维素膜上自左向右包被有检测线和质控C线。

较优化的方案，所述鼠抗人IgG抗体是由时间分辨荧光微球标记的。

较优化的方案，所述检测线包括T1线、T2线、T3线；所述T1线、T2线、T3线和质控C线自左向右依次排列；T1线包被环瓜氨酸肽重组蛋白；T2线包被正五聚体蛋白3重组蛋白；T3线包被双特异性磷酸酶11重组蛋白；质控C线含有羊抗鼠IgG抗体。

一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：在PVC底板的中间位置贴上硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上包被有T1线、T2线、T3线和质控C线；T1线靠近玻璃纤维膜一端，质控C线靠近吸水纸一端；在PVC底板的左侧贴上玻璃纤维膜，并在硝酸纤维素膜的交接处铺上结合垫；结合垫上含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体免疫复合物，结合垫与硝酸纤维素膜有1～2mm的重叠；在PVC底板的右侧贴上吸水纸，吸水纸与硝酸纤维素膜有1～2mm的重叠；切条，得到试纸条；将试纸条装入塑料卡形成试剂盒。

较优化的方案，所述结合垫的制备方法为：

(a)：在时间分辨荧光微球溶液中加入鼠抗人IgG抗体，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡16～18h；加入封闭剂，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡2～3h；在15000～16000rpm下，高速离心15～20min，去除上清，沉淀，用荧光工作液重旋，超声均匀，荧光工作液加入量为原始时间分辨荧光微球溶液体积的1/2；