[发明专利]一种核酸代谢酶活性检测方法

权利要求书

1.一种核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:其步骤如下：

S1，人工合成一条单链核酸片段和一段从3′端互补的引物，通过退火反应形成核酸引物复合物，称之为模板；

S2，将模板、反应缓冲液、荧光修饰的核苷酸衍生物或荧光修饰的核苷酸衍生物类似物、待测定的核酸代谢酶加入同一个PCR管中，在PCR反应仪中反应得到初始产物，并对初始产物进行kit纯化得到初次纯化产物；

S3，将初次纯化产物、Taq反应缓冲液、dNTP、Taq DNA聚合酶加入另一个PCR管中，在PCR反应仪中反应得到二次反应产物，并对二次反应产物进行kit纯化得到二次纯化产物；

S4，对二次纯化产物用毛细管电泳仪分析，收集分离图谱并计算出单位时间内碱基的延伸效率；

S5，制作标准曲线，将S4中并分析计算延伸效率代入标准曲线得出待测定核酸代谢酶的活性；其中步骤S2和S3中的PCR反应条件是温度为10℃—90℃，时间为10s—60min。

2.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:所述模板为一条单链核酸片段，其片段长度为50-150个bp。

3.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:所述引物长度为15-25个bp。

4.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:所述步骤S2的反应条件是温度为45-65℃，时间为1min。

5.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:所述步骤S3的反应条件是温度为72℃，时间为20min。

6.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:所述标准曲线的制备方法为，在步骤S2中将待测定的核酸代谢酶改为按照活性梯度稀释成不同浓度的已知活性的核酸代谢酶，然后依次经过S2、S3、S4步骤得出各种梯度单位活性初始斜率，并制出标准曲线。

7.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:所述步骤S2中，待测定的核酸代谢酶按照浓度梯度稀释成不同浓度的核酸代谢酶，然后每一个浓度的核酸代谢酶均依次经过S2、S3、S4步骤得出各浓度单位活性初始斜率，并代入标准曲线中，得出相对活性单位。

8.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法,其特征在于:所述毛细管电泳仪分析依据荧光染料的种类、分离图谱的峰型大小来计算的。

9.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法,其特征在于:所述核酸代谢酶包括高通量的核酸代谢酶。

10.根据权利要求1所述核酸代谢酶活性检测方法，其特征在于:所述荧光修饰的核苷酸衍生物和荧光修饰的核苷酸衍生物类似物是在3′羟基处保护基团修饰且碱基上携带荧光标识基团的核苷酸衍生物。