[发明专利]米根霉JYH-4-23及其在金银花绿原酸提取中的应用

权利要求书

1.米根霉(Rhizopus oryzae)JYH-4-23，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61966，保藏日期2021年9月29日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。

2.一种权利要求1所述米根霉JYH-4-23在金银花绿原酸提取中的应用，其特征在于所述应用的方法为：将米根霉JYH-4-23经发酵培养的发酵液过滤，获得的滤液即为粗酶液；再将粗酶液与金银花混合，于30–35℃条件酶解10–14h，过滤，得酶解后的金银花粉滤饼；滤饼中加入乙醇水溶液浸提后，再进行超声提取，抽滤，滤液浓缩，获得金银花的醇提浓缩物，真空干燥，获得绿原酸。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述粗酶液体积用量以金银花质量计为3–4mL/g，所述金银花在加入前需在85℃干燥并粉碎过40目筛。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述粗酶液制备方法为：将米根霉JYH-4-23接种于产酶培养基中，于28–30℃、200–250r/min恒温振荡条件下培养36–48h，发酵液过滤，收集滤液即为粗酶液；所述产酶培养基终浓度组成为：麸皮15–20g/L，(NH₄)₂SO₄3–4g/L，KH₂PO₄2–5g/L，MgSO₄ 0.5–1.0g/L，CaCl₂ 0.2–0.5g/L，溶剂为自来水，pH 6.0–6.5。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述产酶培养基组成为：麸皮20g/L，(NH₄)₂SO₄4g/L，KH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.2g/L，溶剂为自来水，pH 6.0。

6.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述米根霉JYH-4-23在发酵前，先经平板培养基活化培养制备孢子液，或经种子培养基扩大培养制备种子液，然后将孢子液或种子液以体积浓度2％–5％的量接入产酶培养基进行产酶培养，所述方法为：

(1)活化培养：将米根霉JYH-4-23接种于PDA平板培养基，于28–30℃恒温培养48–60h，获得平板培养物；平板培养物中加入无菌生理盐水，用接种环搅动使孢子悬浮，获得米根霉JYH-4-23孢子液；所述PDA平板培养基终浓度组成为：马铃薯200g/L，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为自来水，pH自然；

(2)种子扩大培养：步骤(1)活化培养后的米根霉JYH-4-23孢子液按体积浓度2％–5％的接种量接种至种子培养基中，于28–30℃、200–250r/min恒温振荡条件下培养30–36h，得种子液；所述种子培养基终浓度组成为：蔗糖10–15g/L，酵母浸粉3–5g/L，KH₂PO₄ 2–3g/L，MgSO₄ 0.3–0.5g/L，CaCl₂ 0.1–0.2g/L，溶剂为自来水，pH 6.0-6.5。

7.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述乙醇水溶液浸提是指将所述的酶解后的金银花粉滤饼，加入体积浓度70％–80％乙醇水溶液中，搅拌均匀后置于50–60℃水浴中浸提1–2h；所述乙醇水溶液用量以金银花粉质量计为10–15mL/g。

8.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述超声提取是指乙醇水溶液浸提后转入60℃的超声波清洗机中，功率100–200W超声提取30–60min。