[发明专利]米根霉JYH-4-23及其在金银花绿原酸提取中的应用

说明书

本发明公开了一株米根霉JYH‑4‑23及其在金银花绿原酸提取中的应用，在金银花超声乙醇提取绿原酸前，用米根霉JYH‑4‑23的发酵制备的糖苷酶粗酶液预处理，粗酶液中还含有多种糖苷酶，可以水解金银花中的纤维素、半纤维素和果胶等物质，使得其结构组织疏松，在超声乙醇提取时，绿原酸更容易溶出，从而能够显著提高金银花中绿原酸的提取得率。本发明所用的米根霉JYH‑4‑23，是针对能够促进金银花中绿原酸溶出而有目的筛选和诱变选育得到。本发明提供的金银花中绿原酸提取方法，较常规超声乙醇提取法相比，金银花中绿原酸的提取得率可以提高41.5％。

(一)技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一株米根霉JYH-4-23及其在金银花绿原酸提取中的应用。

(二)背景技术

绿原酸(chlorogenic acid，CAS号327-97-9，分子式C₁₆H₁₈O₉，分子量354.3，分子结构式见图1)，又名咖啡鞣酸，由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸，是植物在有氧呼吸过程中经莽草酸途径代谢产生的苯丙素类化合物。绿原酸具有多种生物活性，表现出良好的抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、保肝胆、降血压和降血脂等药理作用。作为一种天然抗氧化剂的绿原酸，可用作食品和水果的保鲜剂；绿原酸能有效去除活性氧自由基，可以保护皮肤胶原蛋白免受损害，防止紫外线对皮肤的伤害，因此也广泛应用于皮肤美白、润肤、防晒和护发等日化用品中。可见，绿原酸在食品、药品和化妆品领域中都用广泛的应用等。

绿原酸天然存在于许多植物中，从高等双子叶植物到较低等的蕨类植物都有分布，主要存在于忍冬科(Caprifoliaceae)、杜仲科(Eucommiaceae)、菊科(Compositae)及蔷薇科(Rosaceae)等植物中。含量较高的植物包括金银花(花中可达5％)、杜仲(树皮中可达5％)、向日葵(籽实中可达3％)、咖啡(咖啡豆中可含2％)、菊花(0.2％)等。此外，普通水果蔬菜中也含微量的绿原酸成分，例如马铃薯、红白菜、胡萝卜、茄子、甘蓝、莴苣、菠菜等[陈绍华,王亚琴,罗立新.天然产物绿原酸的研究进展.食品科技,2008,33(2):195-199]。

虽然目前绿原酸可以采用化学方法合成，但或因合成工艺中使用有毒物质，或因合成产率较低，绿原酸的化学合成工艺尚未工业化使用，人们更青睐植物中提取的天然绿原酸。金银花中绿原酸含量较高，是提取绿原酸的较好原料。国内有较多关于从金银花中提取绿原酸的报道，方法主要有水提法和醇提法，在这两种方法的基础上，又有超声波、微波、超高压和酶解辅助提取法。不同的提取方法有各自的优缺点，不同研究报道的提取得率也差异较大。水提法成本低，但绿原酸得率较低；醇提法的绿原酸得率有显著提高，但需要大量乙醇。在水提或醇提法前，增加超声波、微波、超高压或酶解预处理，可以促进植物材料中的绿原酸溶出，提取得率有显著提高。几种方法相比之下，超声波或微波辅助提取法有一定的优势，不会显著增加提取成本。超高压辅助提取法需要高压设备；酶解辅助提取法往往酶的使用成本较高，以及产物得率提高幅度不大，这两种方法的工业化应用有一定的困难。

为了提高金银花中绿原酸的提取得率，本发明对金银花绿原酸超声波辅助醇提工艺进行改进，增加微生物酶预处理步骤，可以显著提高金银花绿原酸的提取得率。

(三)发明内容

本发明目的是提供一株糖苷酶的微生物新菌株—米根霉(Rhizopus oryzae)JYH-4-23，及其在金银花绿原酸提取中的应用，金银花经预处理后，绿原酸的提取得率可以显著提高。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株产糖苷酶的微生物新菌株—米根霉(Rhizopus oryzae)JYH-4-23，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61966，保藏日期2021年9月29日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。