[发明专利]克氏原螯虾中一个抗病基因及其抗病优异单倍型标记的应用

权利要求书

1.一种克氏原螯虾R基因SNP分子标记的引物在非治疗和非诊断目的的克氏原螯虾R基因抗病能力SNP基因型筛选中的应用，其特征在于所述分子标记的核苷酸序列如序列表SEQID NO:1所示，在该序列的第335位，450位和469位存在等位基因的突变，其中，第335位为C/T突变，450位为C/T突变和469位为G/A突变；所述引物的核苷酸序列如下所示：

正向引物 R-F：5’-CTCACCACGCCCTCGGAGAT-3’，

反向引物 R-R：5’- GGCGACTTACAACCAACGG GA-3’；

以克氏原螯虾DNA为模板，使用引物在如下PCR反应体系及条件下进行扩增：

PCR反应体系：10μl 2×PCR Mix，R基因正、反向引物各1μl，200ng/μl的克氏原螯虾cDNA 1μl，加超纯水7μl；

PCR反应条件：95℃预变性5 min；95℃变性30s；60℃退火30s；72℃延伸30s；35次循环后，在72℃再延伸10 min；4℃保存；

将产物进行测序分析，通过序列比对，确定克氏原螯虾R基因存在三个SNP位点：即第335位存在C/T多态位点，450位存在C/T多态位点和469位存在G/A多态位点；当克氏原螯虾R基因SNP突变位点组合为CCA时，克氏原螯虾对副溶血弧菌具有较强的抗病能力。