[发明专利]一种牛乳促睡眠肽稳态化储存的评价方法

权利要求书

1.一种牛乳促睡眠肽稳态化储存的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）不同储存条件下牛乳促睡眠肽灰分含量的测定；

（2）不同储存条件下牛乳促睡眠肽干燥失重量的测定；

（3）不同储存条件下牛乳促睡眠肽pH值的测定；

（4）不同储存条件下牛乳促睡眠肽肽含量的测定。

2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：步骤（1）具体包括以下操作：

、将分别在4℃和25℃下储存0、7、15、30、60、90 d的牛乳促睡眠肽样品，分多组进行重复试验，每组：将坩埚称重记为m1，将适量牛乳促睡眠肽样品加入坩埚中，再称量坩埚，记为m2；

、将坩埚中牛乳促睡眠肽样品加水分散，再加热使样品充分炭化至无烟，然后置马弗炉中，在525-575℃灼烧4h后，关闭马弗炉冷却到200℃，再取出置于干燥器中冷却至室温，记为m3；

、分别计算单一储存时间储存温度条件下样品中灰分的含量，进而对比各时间温度条件下的含量变化；

单一储存时间储存温度条件下样品中灰分的含量计算如式：

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3.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：步骤（2）具体包括以下操作：

、将分别在4℃和25℃下储存0、7、15、30、60、90 d的牛乳促睡眠肽样品，分成多组进行重复试验，每组：将培养皿带盖称重记为m1，将适量牛乳促睡眠肽样品至培养皿中，加盖，侧摇平铺，然后再称重，记为m2；

、将装有牛乳促睡眠肽样品的培养皿放入101-105℃烘箱和干燥器中至恒重，记为m3；

、分别计算单一储存时间储存温度条件下干燥失重量，进而对比各时间温度条件下的干燥失重量变化；

单一储存时间储存温度条件下样品中干燥失重量计算如式：

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4.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：步骤（3）具体包括以下操作：

将分别在4℃和25℃储存0、7、15、30、60、90 d的牛乳促睡眠肽样品，分多组重复用超纯水配制成20mg/mL的溶液，测定pH，记录，评价条件对pH值的影响。

5.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：步骤（4）具体包括以下操作：

、牛乳促睡眠肽液相色谱方法建立：用标准品配制（浓度为200 μg/mL的）标准储备溶液，经对标准储备溶液进行测定调整洗脱梯度，按照设定的液相条件进行高效液相色谱分析，色谱条件为：Welch C18柱，流动相：A泵超纯水，B泵乙腈，流速1 mL/min，进样量20μL，柱温28℃，检测波长214 nm、280 nm，洗脱条件（乙腈浓度）：10%-20%（0.01-10 min），20%-30%（10-40 min），30%-90%（40-48 min），90%（48-53 min）；用标准储备溶液配制不同浓度的标准混合溶液进行线性方程、线性范围、定量限试验；

、高效液相色谱测定牛乳促睡眠肽各单体含量

将分别在4℃和25℃储存0、7、15、30、60、90 d的牛乳促睡眠肽样品，根据预试验用水稀释至合适浓度，调整洗脱梯度后的色谱条件：Welch C18柱，流动相：A泵超纯水，B泵乙腈，流速1 mL/min，进样量20μL，柱温28℃，检测波长214 nm、280 nm，洗脱条件（乙腈浓度）：10%-20%（0.01-10 min），20%-30%（10-40 min），30%-90%（40-48 min）。

6.根据权利要求5所述的评价方法，其特征在于：液相分析后的液相色谱图得到牛乳促睡眠肽的标准峰主要分布在25-40 min之间，采用此段峰面积之和作为牛乳促睡眠肽含量的定量检测；根据图谱分别对制备液相得到的4个单体的组分进行检测，其中1号和2号峰位置较近，单体1和2合为一个样品进行检测，单体3、单体4单独计算，测定出的峰面积以Y，溶液质量浓度以X表示，进行线性回归计算，得到曲线和总含量曲线，见下表，以3倍信噪比对应的浓度计算出检出限6 μg/kg，以10倍信噪比对应的浓度计算本方法的定量限为20 μg/kg；

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7.根据权利要求5所述的评价方法，其特征在于：步骤（4）中所述的预试验为：配置不同浓度的样品，进行液相分析，观察液相图的显示情况，最终确定合适浓度，即液相图最规整时的样品浓度。