[发明专利]一种用于放疗敏感性检测的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒针对13个SNP位点rs1801131、rs2243250、rs2010963、rs3025039、rs314280、rs314276、rs2868371、rs2242480、rs2030712、rs10898880、rs1805388、rs11466345、rs4680的多态性同时进行检测，所述试剂盒包括如下组分：扩增反应液、检测反应液和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，所述扩增反应液包括扩增引物，所述检测试剂包括定位探针、检测探针、阳性探针和定位参照。

3.根据权利要求2所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，所述13个SNP位点的多态性设计特异性扩增上游引物序列如序列表SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13所示；所述下游引物序列序列如序列表SEQ ID NO:14～SEQ ID NO:26所示。

4.根据权利要求2所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，所述的定位探针序列如SEQ ID NO:27所示。

5.根据权利要求2所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，所述13个SNP位点的的检测探针序列如序列表SEQ ID NO:28～SEQ ID NO:53所示；所述阳性探针序列如序列表SEQ ID NO:54～SEQ ID NO:66所示。

6.根据权利要求3或4任一项所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，检测探针和阳性探针的5’端采用C12氨基修饰和(dT)15修饰。

7.根据权利要求2所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，定位参照序列如序列表SEQ ID NO:67所示。

8.根据权利要求5所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，所述检测探针多态性分辨位点采用LNA标记。

9.根据权利要求1所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒，其特征在于，所述扩增反应液还包括多重PCR预混液、Multi Buffer Mix、Multi酶系Mix、Solution II为Multi EnzymeMix组分。

10.一种采用根据权利要求1～9任一项所述的用于放疗敏感性检测的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

a.将所述扩增反应液与4ul待测DNA均匀进行PCR扩增；

b.PCR产物及杂交液等比例混匀后在95℃条件下变性10min后，立即置于冰浴中5min；

c.取变性的扩增产物10μl，加入基因试剂盒反应区中使其分布均匀，将基因试剂盒平置于杂交盒中，在待定杂交温度的水浴中杂交1小时；

d.将基因试剂盒在SSC洗涤液中漂洗；

e.数据处理和图像分析。