[发明专利]产生基于类泛素或泛素蛋白的生化工具的方法

说明书

本发明提供了产生用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具的方法，包括：在蛋白酶Lbpro的存在下，使成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体与甘氨酰化工具分子接触，从而获得所述用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具。

技术领域

本发明涉及生化技术领域，具体地，涉及产生用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具的方法。

背景技术

类泛素或泛素蛋白在机体的几乎全部生命过程中扮演重要角色，与包括新冠病毒在内的病毒免疫和逃逸过程息息相关。基于类泛素或泛素蛋白的生化工具的研究和开发为研究类泛素或泛素蛋白的相关功能、机制和活性分子调控过程提供了巨大帮助。然而，类泛素和泛素蛋白生化工具的传统制备方法存在产率低、杂质多、时间长的缺陷，这限制了对基于类泛素和泛素蛋白去修饰酶活性的病毒免疫和逃逸的致病机制和病理病因的深入研究。

因此，基于类泛素或泛素蛋白的生化工具有待进一步的开发。

发明内容

本发明旨在至少解决相关技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种产生用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具的方法，所述方法在室温下通过一步法即可在较短时间内以高产率获得用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具。

本发明在一些实施方案中提供了产生用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具的方法。在本发明的实施方案中，所述方法包括：在蛋白酶Lbpro的存在下，使成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体与甘氨酰化工具分子接触，从而获得所述用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具。

根据本发明实施方案的方法，蛋白酶Lbpro特异性切割成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体的C最末端两个甘氨酸前的肽键，从而形成Lbpro-成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体的硫脂中间体；与此同时，该Lbpro-成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体的硫脂中间体与甘氨酰化工具分子进行胺解反应，从而获得所述用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具。所述方法通过一步法即可在较短时间内以高产率获得用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具。

另外，根据本发明实施方案的方法还可以具有如下附加技术特征：

在本发明的一些实施方案中，所述成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体选自：具有SEQ ID NO:2所示序列的成熟化类泛素蛋白ISG15、具有SEQ ID NO:3所示序列的成熟化类泛素蛋白NEDD8、具有SEQ ID NO:4所示序列的成熟化泛素Ub或具有SEQ ID NO:5所示序列的成熟化类泛素蛋白ISG15(C78S)突变体。由此，可以高效获得用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具，同时副产物少并且适用范围广。

在本发明的一些实施方案中，所述甘氨酰化工具分子选自Gly-PA、Gly-Br3、Gly-VME、Gly-Gly-AMC或Gly-Gly-Rho-Gly-Gly。由此，可以以较低成本方便地获得用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具，并且适用范围广。

在本发明的一些实施方案中，所述甘氨酰化工具分子与所述成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体的摩尔浓度比为20:1至1000:1，优选地50:1至800:1，更优选地400:1至500:1，其中所述甘氨酰化工具分子是Gly-PA、Gly-Br3或Gly-VME。由此，可以提高胺解反应的效率，以高产率获得用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具。

在本发明的一些实施方案中，所述甘氨酰化工具分子与所述成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体的摩尔浓度比为20:1至100:1，优选地50:1，其中所述甘氨酰化工具分子是Gly-Gly-AMC。由此，可以进一步提高胺解反应的效率，以高产率获得用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具。